专利名称：一种食品中双酚a和双酚af的快速检测方法
技术领域：
本发明涉及ー种食品中双酚A和双酚AF的快速检测方法，属于分析化学技术领域，更具体的是采用液液分散微萃取-高效液相色谱法对塑料包装食品中双酚A和双酚AF进行測定。
背景技术：
双酹A, (Bisphenol A,简称BPA) —种化工原料,能大大加强环氧树脂、聚碳酸酯和不饱和聚酯树脂等高分子材料的透明性和耐用性。广泛用于包装材料、橡胶防老材料、农药和婴儿用品等的生产中，而且其在生产和使用过程中大量流入环境。双酚A具有雌激素的作用，能干扰正常激素在机体内的产生、释放、运输和代谢的作用，能导致内分泌紊乱，诱发早熟、肥胖、生殖等健康问题，甚至能大大增加患前列腺癌及乳腺癌的风险，胎儿更易受其影响而致崎。另外，其物理和化学性质较为稳定，难以降解，一旦摄取难以在体内代谢。 随着不良事件的发生，如“含双酚A的婴儿奶瓶”事件，其安全性问题成为国内外关注的焦点。同样，双酚AF(BPAF)可以诱导前列腺细胞増殖，也可促进人乳腺癌细胞MCF-7的増殖，Coleman等人已经证实双酚AF同样可以与雌激素受体结合，产生类雌激素效应。然而，市面上普通食品中双酚A和AF含量较低(通常在30 100 yg/Oig-L)范围内)，并且这些产品还存在很多其他物质，这给双酚A和AF的分析测定带来了的困难，因此建立高灵敏度、快速、高选择性和准确的双酚A和AF的測定方法具有重要的现实意义。双酚A结构式如下
Oi1 .”
■ 一;.....ノー_
双酚AF结构式如下
\ / I \ /
'................m -................
目前国内外文献报道双酚A和AF检测方法主要有色谱法、电化学法、荧光法、化学发光法、免疫分析法及联机技术法等，其中电化学法、荧光法、化学发光法和免疫分析法操作繁琐耗时、成本高、回收率较低及人为因素影响较大，而且检测限较高，如CN 101533014 A报道采用免疫法測定双酚A的最低检出限高达5 mg/Kg,以上方法主要是因为没有对样品进行前处理富集，而且样品双酚A的含量较低，检测准确度不足，检测限较高。色谱法及联机技术能准确定量和定性，然而样品成分复杂，含量较低，必须经前处理富集才能进入色谱柱和质谱仪进行定量和定性，因此前处理是样品分析最重要的环节，它决定了检测方法的灵敏度和可行性。相关文献报道了双酚A和AF的样品前处理技术多采用固相萃取(SPE)和浊点萃取法(CPE)等方法，其中SPE技术以效率高，稳定可靠及溶液用量少等优势成为双酚A和AF分析的主要处理方法，但SPE技术也存在萃取柱造价高，操作耗时；而CPE技术同样具有快速高效的优点，但相关的文献报道较少，一些关键的技术还在研究当中。液液分散微萃取(DLLME )技术具有操作简单、快速、费用低、对环境友好、回收率和富集倍数高、检测限低等优点，得到广泛应用，文献报道应用DLLME技术处理的样品大多数为简单基质(如水样等)，而选离子液体做萃取剂结合超声和温控萃取对食品的測定鲜有报道。

发明内容
本发明提供ー种食品中双酚A和双酚AF的快速检测方法，样品前处理采用离子液体(I-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐)做萃取剂，Triton X-100或丙酮为分散剂进行液液分散微萃取，方法中首先对样品进行预处理，然后将萃取剂和分散剂加入经预处理的样品中，混匀，超声乳化萃取，离心，分离下层液滴，按前述方法对上层液再萃取一次，合并两次萃取液滴后进行HPLC分析。本发明具有快速、灵敏和简单及检测成本低等优点，可用于食品中双酚A和AF的快速检测。
本发明是通过如下具体技术方案实现本发明目的
Cl)样品预处理
A、固体样品10.O 15. O g固态食品中加入40 50 mLこ醇溶液(80 90%，V/V),超声提取40 45 min (超声频率为110 120 KHz)，提取液减压浓缩至干，加入10. O 15. O g蒸懼水,混勻，2500 4000 rpm离心5 10 min后取上清液调pH至6. O 7. O,再于1500 2000 rpm离心3 5 min除去其中的悬浮物,取上清液备用；
B、液体样品取10.O 15. O g液体样品在2500 4000 rpm离心5 10 min,离心后取上清液调节pH为6. O 7. O,再于1500 2000 rpm离心3 5 min,取上清液备用；
(2)10 50 UL萃取剂与500 1000 μ L分散剂混合后快速注入预处理的样品中，混匀，在超声频率为60 90 KHz，温度为65 75で的条件下超声乳化3 10 min，冷却至室温，1500 4000 rpm离心5 10 min，分离出下层萃取液滴，再按以上萃取方法重复萃取一次，合并两次萃取得到的下层液滴，备用；
(3)配制一系列双酚A和AF混合标准溶液，在一定的色谱条件下，进行HPLC分析，測定 峰面积与双酚A和AF的线性范围、回收率、标准偏差和检测限及工作曲线的线性回归
方程，
HPLC分析条件如下流动相为こ腈和水的混合液，こ腈和水的混合比例为40 60 55 45,
流速为O. 8 I. O mL/min,柱温为25 40で，检测波长为230 nm,检测时间为8 10 min ；
(4)取步骤(2)下层萃取液滴进行HPLC分析，根据双酚A和AF标准溶液的线性回归方 程，计算分析得到食品中双酚A和AF的含量，并计算回收率，其中HPLC分析条件如下
流动相为こ腈和水的混合液，こ腈和水的混合比例为40 60 55 45 (V/V)，流速为O. 8 I. O mL/min，柱温为25 40で，检测波长为230nm，检测时间为8 10 min。本发明相对现有技木，具有如下显著优点
(O 本发明直接萃取富集样品，无交叉污染，減少待测物的损失量，检测成本低，对
环境友好，富集后的萃取物可直接用HPLC分析測定，快速、准确率高；
(2)本发明方法经分散液液微萃取后，所得富集因子较大，均在70倍以上；检测方法简单、易操作，检出限较低，能灵敏，快速的检测到食品中的双酚A和AF;
(3)本发明选用离子液体(I-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐)作为绿色萃取齐[J，65 75で超声处理3 10 min (超声频率为60 90 KHz )，能大大提高萃取效率；
(4)本发明方法使用范围广，适用于检测用塑料包装的食品，如酸醋、食用油、黄酒、白酒、饼干、酸角糖和泡鸡脚等包装食品。
具体实施例方式下面通过实施例对本发明作进ー步详细说明，通过加标实验验证本发明方法的有效性及回收率，结果见表1-7，但本发明的保护范围不局限于所述内容。
实施例I :食用醋酸中双酚A和双酚AF的快速检测方法，具体步骤如下
(1)取10.0g食用酸醋在2500 rpm转速下离心5 min，取上层清液调pH为6. 0，此时样品中出现少量悬浮物，于1500 rpm离心3 min，将上层清液注入萃取装置中，备用；
(2)20 μ L I-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐和500 μ L Triton X_100混合后快速注入经预处理样液中，摇匀，75で水浴5 min, 75で超声3 min(超声频率为60 KHz)，冷却至室温，4000 rpm离心5 min，取下层萃取液滴。按以上萃取方法进行二次萃取，合并两次萃取得到的下层液滴，注入HPLC进行分离分析，流动相为こ腈和水(45:55，V/V)，流速为1.0mL/min,色谱柱为C18 (150 mmX4. 6 mm, 5 μπι),柱温为25 °C,检测波长为230 nm,检测时间为10 min，加标结果见表1，富集倍数为85 %。表I :样品检出限，精密度和加标回收率结果
权利要求
1.ー种食品中双酚A和双酚AF的快速检测方法，其特征在于按如下步骤进行 (1)样品预处理 A、固体样品10.O 15. O g固态食品中加入40 50 mL体积百分比浓度为80 90%的こ醇溶液，室温下在超声频率为110 120 KHz下超声提取40 45 min，提取液减压浓缩至干，加入10. O 15. O g蒸懼水,混勻，2500 4000 rpm离心5 10 min后取上清液调pH为6. O 7. 0，再于1500 2000 rpm离心3 5 min,取上清液备用； B、液体样品取10.O 15. O g液体样品在2500 4000 rpm离心5 10 min,离心后取上清液调pH为6. O 7. 0，再于1500 2000 rpm离心3 5 min,取上清液备用； (2)10 50 μ L萃取剂与500 1000 μ L分散剂混合后加入预处理样品中，混匀，65-75で水浴5 min，然后在超声频率为60 90 KHz，温度为65 75で的条件下超声乳化3 10 min,冷却至室温，1500 4000 rpm离心5 10 min,分离下层萃取液滴后,再按以上萃取方法重复萃取一次，合并两次萃取的下层液滴，备用； (3)取萃取得到的下层液滴进行HPLC分析，根据双酚A和AF标准溶液作出的线性回归方程，将实际样品峰面积值代入线性回归方程，计算得到食品中双酚A和AF的含量，并计算回收率，其中HPLC分析条件如下流动相为こ腈和水的混合液，こ腈和水的混合比例为体积比40 60 55 :45，流速为O. 8 I. O mL/min，柱温为25 40で，检测波长为230 nm，检测时间为8 10 min。
2.根据权利要求I或2所述食品中双酚A和双酚AF的快速检测方法，其特征在于萃取剂为离子液体I- 丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐。
3.根据权利要求I或2所述食品中双酚A和双酚AF的快速检测方法，其特征在于分散剂为表面活性剂Triton X-100或丙酮。
全文摘要
本发明涉及一种食品中双酚A和双酚AF的检测方法，属于分析化学测定方法技术领域。它以离子液体(1-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐)为萃取剂，以TritonX-100或丙酮为分散剂，通过震荡超声形成乳浊液，离心分离后直接取下层萃取液滴进行HPLC定量分析。本发明的优点是检测步骤简单，易操作，检测限低，富集倍数高，检测成本大大降低，是一种快捷、高效且环境友好的前处理技术，在食品分析领域具有较为广泛的应用前景。
文档编号G01N30/08GK102692474SQ20121018309
公开日2012年9月26日 申请日期2012年6月6日 优先权日2012年6月6日
发明者太志刚, 李英堂, 杨亚玲 申请人:昆明理工大学