专利名称：一种前白蛋白检测试剂盒及其制备方法
技术领域：
本发明属于生物医药技术领域，具体地说涉及一种检测人前白蛋白的检测试剂盒。
背景技术：
血清前白蛋白(PA)是由4个相同亚基组成的四聚体,分子量为55. OkD。具有重要的生理活性。它与甲状腺素结合球蛋白(TBG)和白蛋白一起，协同參与甲状腺素的转运。PA在甲状腺激素运输中的作用仅次于TBG。TBG负责转运甲状腺素总量的70% 75%，PA则转运15% 20%，而ALB转运的甲状腺素更少些(10%)。在正常生理条件下，血浆甲状腺素几乎全部(99. 98%)通过与这三种蛋白质结合运转，到达靶细胞。
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PA的另一重要功能是协助视黄醇结合蛋白(RBP)转运视黄醇。当机体需要维生素A时，贮存在肝脏内的视黄醇酯被水解，游离的视黄醇与RBP结合，被分泌到血循环中，再与PA结合，所形成的视黄醇RBP-PA大分子结合物，通过循环转运到有特异性RBP受体结合部位的靶组织中，一进入靶细胞，视黄醇-RBP-PA结合物即分离。急性、亚急性重症肝炎起病后一周内，PA的下降变化远较ALB敏感。各型肝炎患者血清PA水平均有不同程度的降低，以肝硬化和重症肝炎降低最显著。因此，血清中的PA可作为中毒肝病的早期诊断指标和观察肝脏功能恢复的灵敏指标。前白蛋白測定方法很多，包括(一)放射免疫測定法(RIA)、(ニ)酶联免疫測定法(ELISA)、(三)乳胶凝集试验和免疫比浊法、(四)荧光免疫測定法。这些方法具有操作繁琐、耗时长、过度浪费资源的缺点，不适于常规检验。

发明内容
本发明的目的是提供一种前白蛋白的检测试剂盒。该试剂盒可直接应用于全自动生化分析仪上，结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大規模推广。本发明的另ー目的是提供上述检测试剂盒的生产制备及使用方法。为实现上述目的，本发明提供的试剂盒组成为
试剂Rl :缓冲液、聚こニ醇、叠氮钠、こニ胺四こ酸钠、牛血清白蛋白；
试剂R2 :缓冲液、结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、こニ胺四こ酸钠、牛血清白蛋白。本发明提供的上述试剂盒的制备方法及操做步骤如下
(a)按下列比例配制好试剂
试剂Rl
Tris 缓冲液 200-220mmol/L 聚こニ醇5-10 mmol /I,
叠氮钠1-5 mmol/L
こニ胺四こ酸钠l_5mmol/L牛血清白蛋白 l-5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200-220mmol/L
结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5% (v/v)
吐温-20l-5mmol/L
叠氮钠0. 5-3 mmol/L
こニ胺四こ酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ;
(b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应；·
(c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值；
(d)根据吸光度变化值计算出样本中前白蛋白的浓度。
具体实施例方式下述实施例是为了更详细的解释本发明，但不应理解为本发明局限于此。实施例I :
本发明的试剂盒举例是双试剂，其中
试剂Rl
Tris 缓冲液 200mmol/L 聚こニ醇8 mmol /I,
叠氮钠5 mmol/L
こニ胺四こ酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200mmol/L
结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 5% (v/v)
吐温 _20Smmol /I,
叠氮钠3 mmol/L
こニ胺四こ酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L。实施例2 :试剂盒使用方法。I.试剂准备，试剂为液体双试剂，开瓶即用，其中
试剂Rl
Tris 缓冲液 200mmol/L 聚こニ醇8 mmol /I,
叠氮钠5 mmol/L
こニ胺四こ酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L ;
试剂R2
Tris 缓冲液 200mmol/L结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 5% (v/v)
吐温 _20Smmol /I,
叠氮钠3 mmol/L
こニ胺四こ酸钠5mmol/L 牛血清白蛋白 5mmol/L。2.全自动生化仪參数设置
(a)检测温度37°C
(b)检测波长主波长为340nm；· (c)反应时间10分钟。3.检测步骤(全部在全自动生化分析仪中完成)
(a)取200ii L试剂I和2 ii L血清样本混匀；
(b)将混匀后的溶液在37°C温育5分钟，读取吸光度Al；
(c)再添加60ii L试剂2，反应5分钟后，读取吸光度A2 ；
(d)计算AA= A2 - Al。4.通过吸光度变化值计算出前白蛋白的浓度。本发明具有的优点
该试剂盒结果准确性强、试剂稳定性好、使用方便、便于大规模推广。所需检测仪器(生化分析仪)在各大医院和检测中心普遍使用。
权利要求
1.一种前白蛋白检测试剂盒，其组成为试剂R1、试剂R2 ； 其中 a、试剂Rl 包括200-220mmol/L Tris 缓冲液、5-10 mmol/L 聚乙二醇、1_5 mmol/L 叠氮钠、l-5mmol/L乙二胺四乙酸钠、l_5mmol/L牛血清白蛋白； b、试剂R2200-220mmol/L Tris缓冲液、结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、l_5mmol/L 吐温 _20、0. 5-3 mmol/L 叠氣纳、l_5mmol/L 乙二胺四乙酸纳、l-5mmol/L 牛血清白蛋白。
2.权利要求I的试剂盒，其特征在于试剂R2中的前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子的制备方法为10. 5mg/ml的前白蛋白单克隆抗体与10%的乳胶颗粒(直径50_100nm),加入到200-220mmol/L Tris缓冲液中，震荡反应4小时，离心去上清，再用200-220mmol/L Tris缓冲液稀释至O. 5%，并加入O. 1-0. 3 mmol/L叠氮钠。
3.上述试剂盒的制备和操作方法，主要步骤为 (a)按下列比例配制好试剂 试剂Rl Tris 缓冲液 200-220mmol/L 聚乙二醇5-10 mmol /I, 叠氮钠1-5 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; 试剂R2 Tris 缓冲液 200-220mmol/L 结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子 3.5-5% (v/v) 吐温-20l-5mmol/L 叠氮钠0. 5-3 mmol/L 乙二胺四乙酸钠l_5mmol/L 牛血清白蛋白 l-5mmol/L ; (b)将试剂与待测样本按一定比例混合，使其完全反应； (c)用半/全自动生化分析仪测定吸光度变化值； (d )根据吸光度变化值计算出样本中前白蛋白的浓度。
4.权利要求3的方法，其特征在于，被测样品与试剂比例应控制在I: 125到I :135之间。
5.权利要求3的方法，其特征在于，反应温度为37(±1) °C。
6.权利要求3的方法，其特征在于，反应时间为10分钟。
7.权利要求3的方法，其特征在于，用半/全自动生化分析仪检测的波长为340nm。
全文摘要
一种前白蛋白的检测试剂盒。试剂盒盒体内包括试剂R1缓冲液、聚乙二醇、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白；试剂R2缓冲液、结合有前白蛋白单克隆抗体的乳胶粒子、吐温-20、叠氮钠、乙二胺四乙酸钠、牛血清白蛋白。通过将样品与试剂按一定的体积比混合，使之发生一系列反应，再将反应物置于半/全自动生化分析仪下，检测主波长340nm处吸光度变化的速度，从而测算出前白蛋白的浓度大小。本试剂盒具有准确、稳定、方便的优点。
文档编号G01N33/577GK102788881SQ20121029202
公开日2012年11月21日 申请日期2012年8月16日 优先权日2012年8月16日
发明者谢兵 申请人:北京恩济和生物科技有限公司