专利名称：一种用于多巴胺检测的薄层检测池及其制备方法
技术领域：
本发明涉及的是一种电化学检测技术领域的装置及其制备方法，具体是一种用于多巴胺检测的薄层检测池及其制备方法。
背景技术：
帕金森病是一种常发生于老年人以黑质多巴胺能神经元特征性缺失为主要病理改变的中枢神经系统变性疾病，其临床症状主要表现为静止性震颤、运动迟缓、肌张力增高等，其发病率随年龄的增加而提高，如果患者没有得到及时合理的诊断与治疗，很容易导致身体机能下降，甚至生活不能自理，最后出现各种并发症，如肺炎、秘尿系统感染等。病情发展到晚期将会全身僵直，卧床不起，导致器官功能衰竭而危及生命。研究表明，多巴胺作为生物体中一种非常重要的神经递质，它的浓度与帕金森病的发生有着密切关系。由此可见检测多巴胺的水平对帕金森病病理的研究具有重要意义。由于多巴胺缺少发光基团，这限制了目前很多测定多巴胺的方法的应用，例如焚光光谱法，紫外分光光度法，极谱法和气相色谱-质谱联用法等。因此寻找一种灵敏，高效的检测多巴胺的方法具有重要意义。液相色谱-电化学检测技术由于具有所需样品少，灵敏度高，分离效率高和进样体积小等特点而广泛用于生物样品的检测，但是由于生物体内多巴胺的含量很低，因此开发出高灵敏度(用于体内痕量多巴胺的检测)测定多巴胺的电化学传感器弓I起了人们的研究兴趣。经过现有技术的检索发现，“用于多巴胺检测的薄层检测池及其制备方法”提出利用聚乙烯醇和钼粒子修饰的电极检测多巴胺；“体液中多巴胺的电化学检测方法”提出检测多巴胺的方法是利用纳米氧化铈及聚丙烯酸修饰电极进行检测。虽然两种检测方式都实现了多巴胺的检测，但是两种电极都是经过两步修饰后制得，过程繁琐，并均需要贵金属粒子。

发明内容
本发明针对现有技术存在的上述不足，提供一种用于多巴胺检测的薄层检测池及其制备方法，通过简单步骤实现对生物样品中多巴胺浓度的检测。本发明是通过以下技术方案实现的，一种用于多巴胺检测的薄层检测池，包括工作电极、参比电极和辅助电极，其中工作电极、参比电极、辅助电极分别与高效液相色谱及电化学系统相连接，其特征在于，所述的工作电极包括尼古丁层和电极基体，其中尼古丁层沉积包覆于电极基体外部。所述的工作电极中尼古丁层的厚度(H)为50 800纳米；所述的电极基体为玻碳材质的电极基体。本发明提供一种用于多巴胺检测的薄层检测池的制备方法，其特征在于，包括以下步骤第一步工作电极的制备
将玻碳电极进行抛光处理后，在二次蒸馏水中超声清洗；清洗后的玻碳电极放入pH = 5. 0 7. 0的磷酸盐缓冲溶液中，在-0. 2V +2. OV 的电位范围内，以15-20mV/s的扫描速率进行循环扫描处理10 20周期；循环扫描后的玻碳电极放入质量百分比为0. 7% 5. 0%尼古丁的磷酸盐缓冲溶液中，该缓冲溶液的pH = 5. 0 7. 0，在0. OV +1. OV的电位范围内，以15 20mV/s的扫描速率再次进行循环扫描处理6 30个周期；将经过二次循环扫描处理后的玻碳电极取出后，用二次蒸馏水清洗，制得工作电极；第二步依次将参比电极、工作电极和辅助电极与高效液相色谱及电化学系统相连，其中参比电极为Ag-AgCl电极；辅助电极为不锈钢制成的电极；高效液相色谱采用 Luna 5 μ mC18反相色谱柱，液相色谱使用的流动相为含有10% 30%甲醇和0. 2mol/L的 pH = 5. 0 7. 0的磷酸盐缓冲溶液，该流动相的流速为1. OmL/min，制成用于多巴胺检测的薄层检测池。所述的磷酸盐缓冲溶液是指磷酸根浓度为0. 2mol/L的磷酸二氢钾或磷酸氢二钠溶液，利用磷酸调节PH值。本发明通过以下步骤进行检测首先打开液相色谱及电化学系统，使得不同已知浓度的多巴胺样本随磷酸盐缓冲溶液经Lima 5ym C18反相色谱柱，依次流过参比电极、工作电极和辅助电极的表面；然后利用CHI832型电化学系统记录下不同样本产生的电流信号，根据不同样本下的已知多巴胺浓度及对应实测的响应电流的电流值作为纵横坐标进行拟合，对薄层检测池进行样本学习；再将脑微渗析液样品20 μ L置于制备好测试环境中，测得响应电流的电流值，根据经过样本学习得到的多巴胺浓度-相应电流的线性关系图读出该电流值对应的脑微渗析液样品中所含的多巴胺浓度。本发明所述方法能够以简单步骤实现多巴胺浓度的检测，检测线性范围可达到为 1.0Χ 1(Γ9 1. OX l(rtiol/L，检测分辨率为 l.OX l(Tlclmol/L。


附图1为本发明应用工作原理图。附图2为工作电极示意图。
具体实施例方式实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实施例。实施例1将玻碳电极进行抛光处理后，在二次蒸馏水中超声清洗；清洗后的玻碳电极放入pH = 7. O的磷酸盐缓冲溶液中，在-0. 2V +2. OV的电位范围内，以20mV/s的扫描速率进行循环扫描处理10个周期；循环扫描后的玻碳电极放入质量百分比为0. 7%尼古丁的磷酸盐缓冲溶液中，该缓冲溶液的pH = 7. 0，在0. OV +1. OV的电位范围内，以20mV/s的扫描速率再次进行循环扫描处理6周期；将经过二次循环扫描处理后的玻碳电极取出后，用二次蒸馏水清洗，制得工作电极；制得的工作电极，Ag-AgCl电极作为参比电极，不锈钢电极为辅助电极，依次将参比电极、工作电极和辅助电极与高效液相色谱及电化学系统相连，通过Lima 5ym C18反相色谱柱进行分离，液相色谱使用的流动相为质量百分比为10%甲醇和0. 2mol/L的pH =6. 0的磷酸盐缓冲溶液，该流动相的流速为1. OmL/min，制成用于多巴胺检测的薄层检测池。制得的用于多巴胺检测的薄层检测池，包括工作电极、参比电极和辅助电极，其中工作电极、参比电极、辅助电极分别与高效液相色谱及电化学系统相连接，其特征在于， 所述的工作电极包括尼古丁层和电极基体，其中尼古丁层沉积包覆于电极基体外部。所述的工作电极中尼古丁层的厚度H为50纳米；所述的电极基体为玻碳材质的电极基体。实施例2将玻碳电极进行抛光处理后，在二次蒸馏水中超声清洗；清洗后的玻碳电极放入pH = 5. O的磷酸盐缓冲溶液中，-0. 2V +1. OV的电位范围内，以15mV/s的扫描速率，进行循环扫描处理13个周期；循环扫描后的玻碳电极放入质量百分比为1. 0%尼古丁的的磷酸盐缓冲溶液中， 该缓冲溶液的PH = 5. 0，在0. OV +1. OV的电位范围内，以15mV/s的扫描速率，再次进行循环扫描处理10个周期；将经过二次循环扫描处理后的玻碳电极取出后，用二次蒸馏水清洗，制得工作电极；制得的工作电极，Ag-AgCl电极作为参比电极，不锈钢电极为辅助电极，依次将参比电极、工作电极和辅助电极与高效液相色谱及电化学系统相连，通过Lima 5ym C18反相色谱柱进行分离，液相色谱使用的流动相为质量百分比为10%甲醇和0. 2mol/L的pH = 5.0的磷酸盐缓冲溶液，该流动相的流速为1. OmL/min，制成用于多巴胺检测的薄层检测池。制得的用于多巴胺检测的薄层检测池，包括工作电极、参比电极和辅助电极，其中工作电极、参比电极、辅助电极分别与高效液相色谱及电化学系统相连接，其特征在于， 所述的工作电极包括尼古丁层和电极基体，其中尼古丁层沉积包覆于电极基体外部。所述的工作电极中尼古丁层的厚度H为400纳米；所述的电极基体为玻碳材质的电极基体。实施例3将玻碳电极进行抛光处理后，在二次蒸馏水中超声清洗；清洗后的玻碳电极放入pH = 7. O的磷酸盐缓冲溶液中，在-0. 2V +2. OV的电位范围内，以20mV/s的扫描速率，进行循环扫描处理20个周期；循环扫描后的玻碳电极放入质量百分比为5. 0%尼古丁的磷酸盐缓冲溶液中，该缓冲溶液的PH = 7. 0，在0. OV +1. OV的电位范围内，以20mV/s的扫描速率，再次进行循环扫描处理30个周期；将经过二次循环扫描处理后的玻碳电极取出后，用二次蒸馏水清洗，制得工作电极；制得的工作电极，Ag-AgCl电极作为参比电极，不锈钢为辅助电极，依次将参比电极、工作电极和辅助电极与高效液相色谱及电化学系统相连，通过Lima 5ym C18反相色谱柱进行分离，液相色谱使用的流动相为质量百分比为30%甲醇和0. 2mol/L的pH = 7. 0的磷酸盐缓冲溶液中，该流动相的流速为1. OmL/min，制成用于多巴胺检测的薄层检测池。制得的用于多巴胺检测的薄层检测池，包括工作电极、参比电极和辅助电极，其中工作电极、参比电极、辅助电极分别与高效液相色谱及电化学系统相连接，其特征在于， 所述的工作电极包括尼古丁层和电极基体，其中尼古丁层沉积包覆于电极基体外部。所述的工作电极中尼古丁层的厚度H为800纳米；所述的电极基体为玻碳材质的电极基体。
权利要求
1.一种用于多巴胺检测的薄层检测池，包括工作电极、参比电极和辅助电极，其中 工作电极、参比电极、辅助电极分别与高效液相色谱及电化学系统相连接，其特征在于，所述的工作电极包括尼古丁层和电极基体，其中尼古丁层沉积包覆于电极基体外部。
2.根据权利要求1所述的用于多巴胺检测的薄层检测池，其特征在于，所述的工作电极中尼古丁层的厚度为50 800纳米；所述的电极基体为玻碳材质的电极基体。
3.根据权利要求1或2所述的用于多巴胺检测的薄层检测池的制备方法，其特征在于， 包括以下步骤第一步工作电极的制备将玻碳电极进行抛光处理后，在二次蒸馏水中超声清洗；清洗后的玻碳电极放入pH = 5. 0 7. 0的磷酸盐缓冲溶液中，在-0. 2V +2. OV的电位范围内，以15-20mV/s的扫描速率进行循环扫描处理10 20周期；循环扫描后的玻碳电极放入质量百分比为0. 7% 5. 0%尼古丁的磷酸盐缓冲溶液中，该缓冲溶液的pH = 5. 0 7. 0，在0. OV +1. OV的电位范围内，以15 20mV/s的扫描速率再次进行循环扫描处理6 30个周期；将经过二次循环扫描处理后的玻碳电极取出后，用二次蒸馏水清洗，制得工作电极；第二步依次将参比电极、工作电极和辅助电极与高效液相色谱及电化学系统相连， 其中参比电极为Ag-AgCl电极；辅助电极为不锈钢制成的电极；高效液相色谱采用Lima 5 μ mC18反相色谱柱，液相色谱使用的流动相为含有10% 30%甲醇和0. 2mol/L的pH = 5. 0 7. 0的磷酸盐缓冲溶液，该流动相的流速为1. OmL/min，制成用于多巴胺检测的薄层检测池。
4.根据权利要求3所述的用于多巴胺检测的薄层检测池的制备方法，其特征在于，所述的磷酸盐缓冲溶液是指磷酸根浓度为0. 2mol/L的磷酸二氢钾或磷酸氢二钠溶液，利用磷酸调节PH值。
全文摘要
一种电化学检测技术领域的用于多巴胺检测的薄层检测池及其制备方法，包括工作电极、参比电极和辅助电极，其中工作电极、参比电极、辅助电极分别与液相色谱及电化学系统相连接，所述的工作电极包括尼古丁层和电极基体，其中尼古丁层沉积包覆于电极基体外部。本发明制备所得的薄层检测池能够以简单步骤实现多巴胺浓度的检测，检测线性范围可达到为10×10-9～10×10-5mol/L，检测分辨率为10×10-10mol/L。
文档编号G01N27/27GK102455313SQ20101052826
公开日2012年5月16日 申请日期2010年11月1日 优先权日2010年11月1日
发明者张鹏, 王丹, 王瑾 申请人:上海纳米技术及应用国家工程研究中心有限公司