专利名称：一种尿蛋白液体定量检测试剂及方法
技术领域：
本发明属于生物技术领域,涉及ー种尿蛋白(Urinary Protein)液体定量检测试剂和方法。
背景技术：
尿液是由某些血液成分经过肾小球滤过作用，肾小管重吸收、集合、排泌形成的。临床尿液检测可以帮助医生了解病患的泌尿生理功能和病理功能的变化，也可以间接反映全身多脏器及系统的功能情況。蛋白尿指的是尿液中含有非正常高浓度蛋白质的病 症，尿蛋白主要为白蛋白，同时也包含ー些球蛋白和肾元分泌的蛋白质。在正常情况下，大多数蛋白质是不可以通过肾小球的滤过作用而进入尿液的，但是在肾脏功能受到损坏的情况下，ー些蛋白质会进入尿液，形成蛋白尿。对尿中蛋白质含量进行检测的意义在于可以诊断和治疗肾脏及相关系统疾病，帮助医生清晰地了解病人病情的严重程度。国内外临床尿检验非常普遍，许多与肾功能，心血管，代谢病，感染病等有关领域的检验都需要进行尿液检测。常规的尿检验包括以下10项葡萄糖(GLU)、胆红素(BIL)、尿胆原(URO)、酮体(KET)、白细胞(LEC)、亚硝酸盐(NIT)、蛋白质(PRO)、酸碱度(pH)、潜血(BLD)和比重(SG)，若是12项检验还包括维生素C (VC)和微量白蛋白(Microalbumin)。国内目前应用的尿检验技术主要是干化学试纸定性检验系统，只能提供定性分析结果如阴性或阳性，不能定量。此外，干化学试纸法受影响因素也较多，临床工作中不可避免地会出现假阴性和假阳性，很难为临床医生提供准确的诊断信息。

发明内容
本发明所要解决的技术问题是弥补现有的干化学试剂系统存在的缺陷，提供ー种尿蛋白液体定量检测试剂及方法。本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是该尿蛋白液体定量检测试剂的制备方法包含以下制备步骤
a、往O.I - O. 7L有机溶剂中加入O. I 一 I. Og焦酚，搅拌至完全溶解，形成焦酚溶液；
b、用蒸懼水溶解下列化合物O.I — O. 5g琥拍酸、O. 01 — O. Ig苯甲酸钠、O. 01 —
I.Og钥酸钠,完全溶解,得到中间溶液；
C、将中间溶液与焦酚溶液混合，搅拌混匀后定容至1L，形成尿蛋白液体定量检测试剂。本发明所述的有机溶剂为甲醇或こ醇或ニ甲基甲酰胺。本发明所述的有机溶剂优选为甲醇。本发明所述尿蛋白液体定量检测试剂的制备步骤的优选配比为
a、往O.5L有机溶剂中加入O. 4g焦酚，搅拌至完全溶解，形成焦酚溶液；
b、用O.4L蒸懼水溶解下列化合物0. 5g琥拍酸、O. 09g苯甲酸钠、O. 06g钥酸钠,完全溶解，得到中间溶液；C、将中间溶液与焦酚溶液混合，搅拌混匀后定容至1L，形成尿蛋白液体定量检测试剂。本发明所述的任意一种试剂的尿蛋白液体定量检测方法，包含以下步骤
a、把所述尿蛋白液体定量检测试剂分装后放入自动化分析仪的Rl试剂仓，然后进行尿蛋白检测项目的參数设置；样品体积2 - 10ml,Rl试剂50 — 150ml，校准类型4AB，波长600nm，检测方法终点法，测光点0 — 20 ;
b、设定4个标准品浓度0mg/dL、30mg/dL、100mg/dL、250mg/dL,测定不同浓度标准品的吸光值，制作浓度对吸光值的标准曲线；
C、根据标准曲线进行试剂检测灵敏度分析；
d、根据标准曲线进行样品的精密度和回收率试验；
e、根据标准曲线进行常用内源性物质的干扰分析试验。本发明所述的尿蛋白液体定量检测方法，灵敏度为lmg/dL。本发明所述的尿蛋白液体定量检测方法，检测尿液样本里的尿蛋白与内源性物质抗坏血酸、肌酐和葡萄糖无交叉反应。本发明所述的自动化分析仪为Hitachi7180、01ympus5400或迈瑞BS-800。本发明所述的自动化分析仪优选为01ympus5400。本发明同现有技术相比具有以下优点及效果该液体定量检测试剂及方法是利用生化反应原理，采用液体试剂系统，借助自动化分析仪对尿液中的蛋白质进行定量检测的方法，同时具有定量、准确、快速和操作简便的优点。


图I为01ympus5400自动化分析仪测定尿蛋白的标准曲线。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明做进ー步的详细说明，以下实施例是对本发明的解释而本发明并不局限于以下实施例。实施例I :ー种尿蛋白液体定量检测试剂的制备步骤
a、往O.5L有机溶剂中加入O. 4g焦酚，搅拌至完全溶解，形成焦酚溶液；
b、用O.4L蒸懼水溶解下列化合物0.5g琥拍酸、O. 09g苯甲酸钠、O. 06g钥酸钠,完全溶解，得到中间溶液；
C、将中间溶液与焦酚溶液混合，搅拌混匀后定容至1L，形成尿蛋白液体定量检测试剂。其它实施例2 — 13 :其它实施例的制备步骤与实施例I相同，区别仅在于配比，故
将其它实施例的配比列表如下
权利要求
1.ー种尿蛋白液体定量检测试剂，其特征在于所述尿蛋白液体定量检测试剂的制备方法包含以下制备步骤 a、往O.I — O. 7L有机溶剂中加入O. I — I. Og焦酚，搅拌至完全溶解，形成焦酚溶液； b、用蒸懼水溶解下列化合物O.I — O. 5g琥拍酸、O. 01 — O. Ig苯甲酸钠、O. 01 —I. Og钥酸钠,完全溶解,得到中间溶液； C、将中间溶液与焦酚溶液混合，搅拌混匀后定容至1L，形成尿蛋白液体定量检测试剂。
2.根据权利要求I所述的尿蛋白液体定量检测试剂，其特征在于所述的有机溶剂为甲醇或こ醇或ニ甲基甲酰胺。
3.根据权利要求2所述的尿蛋白液体定量检测试剂，其特征在于所述的有机溶剂为甲醇。
4.根据权利要求I或2或3所述的尿蛋白液体定量检测试剂，其特征在于所述制备步骤的配比为 a、往O.5L有机溶剂中加入O. 4g焦酚，搅拌至完全溶解，形成焦酚溶液； b、用O.4L蒸懼水溶解下列化合物:0.5g琥拍酸、O. 09g苯甲酸钠、O. 06g钥酸钠,完全溶解，得到中间溶液； C、将中间溶液与焦酚溶液混合，搅拌混匀后定容至1L，形成尿蛋白液体定量检测试剂。
5.一种用权利要求1、2、3、4中所述的任意一种试剂的尿蛋白液体定量检测方法，其特征在于包含以下步骤 a、把所述尿蛋白液体定量检测试剂分装后放入自动化分析仪的Rl试剂仓，然后进行尿蛋白检测项目的參数设置；样品体积2 - 10ml,Rl试剂50 — 150ml，校准类型4AB，波长600nm，检测方法终点法，测光点0 — 20 ; b、设定4个标准品浓度0mg/dL、30mg/dL、100mg/dL、250mg/dL,测定不同浓度标准品的吸光值，制作浓度对吸光值的标准曲线； C、根据标准曲线进行试剂检测灵敏度分析； d、根据标准曲线进行样品的精密度和回收率试验； e、根据标准曲线进行常用内源性物质的干扰分析试验。
6.根据权利要求5所述的尿蛋白液体定量检测方法，其特征在于灵敏度为lmg/dL。
7.根据权利要求5所述的尿蛋白液体定量检测方法，其特征在于检测尿液样本里的尿蛋白与内源性物质抗坏血酸、肌酐和葡萄糖无交叉反应。
8.根据权利要求5所述的尿蛋白液体定量检测方法，其特征在于所述的自动化分析仪为 Hitachi7180、01ympus5400 或迈瑞 BS — 800。
9.根据权利要求8所述的尿蛋白液体定量检测方法，其特征在于所述的自动化分析仪为 01ympus5400。
全文摘要
本发明公开了一种尿蛋白的液体定量检测试剂及方法，由焦酚溶液与一种中间溶液混合制得；所述中间溶液由蒸馏水溶解一定量的琥珀酸、苯甲酸钠、钼酸钠得到；利用自主研发的尿蛋白液体定量检测试剂结合自动化分析仪，能准确定量尿样本中蛋白质的含量，给临床医生提供准确的信息，为实现定量、自动化、快速检测尿液样本提供了可能。
文档编号G01N33/68GK102680701SQ20121012800
公开日2012年9月19日 申请日期2012年4月27日 优先权日2012年4月27日
发明者孟雷, 田军, 蔡江丽, 虞留明 申请人:嘉兴九七九生物技术有限公司