专利名称：中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法
技术领域：
本发明涉及一种成分极其复杂的混合物溶液的非分离提取光谱分析鉴定、鉴别方法，尤其是涉及一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，属于中药检测技术领域。
对于中药注射剂体系目前更多的是主张用高效液相色谱(HPLC)(利用反相柱)尽量使其有关各种组分一一分离，然后利用质谱(包括电喷雾质谱等)确定其分子量，甚至借助于其它的分析仪器，如核磁共振，X-衍射分析等以便获得它们的分子式及其结构式。这是一个理想的方案，但是目前此方法因为存在着如下困难，只能部分地实现(1)色谱分离的条件需要认真研究当体系存在着表面活性剂时，常常会使分离过程变得复杂化。(2)对于HPLC，若分离条件不佳，则不能将相似物分离开来，对于质谱，可获得到化合物的质量，但可能不能确定其结构。(3)有时分离物不能检出质谱法需要使被测分子电离化方可测出，倘若某些分子不便电离，则不易测出。(4)LC分离法，耗时较长，实验操作条件甚为苛刻，要特定的色谱柱，特定的流动相，仪器、色谱柱价格较贵，维护费较高。(5)可控指标少，有的含量过低实际成分可能少说有数十种，然而作为质量可控指标仅几种，有的控制成分仅占μg/g数量级甚至更低。它存在着两个问题，目前仍然不能圆满解决。a.有效成分或指标成分的有效性，即有的可控指标并非有效成分；b.由于实际的组分远远多于3种，因此丧失了整体分析的观念。(6)标准不完善，缺乏质量标准的原料被分离出来的化合物，目前不能一一全部确定，尤其是其含量测定时，通常需要有作对照用的标准品。通常欲获取其中的有效成分的标准化合物(作为参照物)已非易事。然而目前能真正确定的化合物甚少，欲获取全组分的标准化合物更不容易，是不切实际的，因此不便推广。(7)LC方法的分离处理便丧失分析体系的原本性和配伍性。(8)就目前对现有中药的质量控制水平，由于中药材的生产、采收、加工制备过程未能规范化，即从中药药材的源头尚不能得到严格控制，因此直接影响到后续所生产出的中药注射剂色谱指纹图的规范化。
通常使用的紫外(UV)光谱法存在着以下问题(1)含量测定方法科学性不强比如以芦丁作为黄酮类的代表计总黄酮含量，甚至以非黄酮类的绿原酸作为对照品来测总黄酮含量之误。(2)缺乏含量测定由于未规定含有控制指标是何物种，仅以某一波长的紫外光吸收率为指标，因此专属性不强。《中药鉴别紫外谱线组法及应用》(袁久荣著，人民卫生出版社，1999年，北京)中，曾提出“紫外谱线组法”来鉴别中药(四种溶剂的浸取液的UV谱，导数UV谱)。近来，田进国(中国药科大学学报，1997，27(1)24-28)对数十种中药材进行红外谱线组的鉴别。他们都是在对中药预先作多溶剂的浸取分离后进行鉴别、鉴定的。因此在一定程度上破坏体系的原本性及其配伍性。
本发明提出的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)冷冻和真空除去试样中的溶剂；(2)上述脱去溶剂的试样用溴化钾压片制样；(3)测定试样的普通红外光谱、漫反射近红外、漫反射中红外光谱、反射光谱及衰减全反射光谱；(4)求出并绘出上述相应红外光谱图的二阶导数谱；(5)测定压片试样的二维相关红外谱，产生它的可以是任何形式的扰动；(6)分级对比相应图谱，即可直接构成中药注射剂的非分离提取鉴定、鉴别。
在上述方法中，步骤(1)所述的冷冻时所采用的冷冻剂为冰、干冰、液态空气、液态氮气。
在上述方法中，步骤(5)所述的二维相关红外谱可以是同步谱，异步谱或两者兼用。
在上述方法中，步骤(5)所述的二维相关红外谱可以是各种形式的图象，优选为等强度图、鱼网图，多维立体图，彩色图。
在上述方法中，步骤(5)所述的扰动形式为热、光、电、磁、机械力的扰动。
在上述方法中，步骤(6)所述的分级对比可以是三种红外谱图单独地，或者将两者结合在一起地，或者将三者结合在一起相互对比。
在上述方法中，所述分级对比为一级、二级、三级对比。
在上述方法中，所述分级对比中的一级对比为(1)观察图谱总体形状或形貌，即峰位、峰强度、峰形的相似性来初步鉴别；(2)在1800～400cm-1区间内选取3～5个最强谱峰，其峰位波动在±2cm-1之内，视为相同或相近。并且比较各强峰之间的相对强度(比)的大小和次序；(3)在1800～400cm-1区间内选取3～5个次强谱峰，其峰位波动在±2cm-1之内，视为相同或相近为辅来鉴别。
在上述方法中，所述分级对比中的二级对比为(1)观察图谱总体形状或形貌，即峰位、峰强度、峰形的相似性来初步鉴别；(2)在1800～400cm-1区间内选取上述最强谱峰峰位就近的导数峰视为相同或相近，其峰位波动在±2cm-1之内，并且比较各强峰之间的相对强度的大小和次序；(3)在1800～400cm-1区间内选取上述最强谱峰的肩峰峰位出现与否来鉴别，其峰位波动在±2cm-1之内。
在上述方法中，所述分级对比中的三级对比为用二维相关谱进行对比来判断，选取同步相关谱中的强峰或强峰簇的自动峰峰位及其强度，以及所选取的自动峰与其它自动峰之间的交叉峰的正负号的异同来鉴别它们的异同。
基于红外本身的丰富的指纹性及利用部分特征峰的峰位、峰形及其变化，峰强度或/及相对峰强度的变化，本发明提出用无损的红外光谱法直接进行中药的鉴定鉴别。包括与标准样的图谱比对法，借助于计算机辅助解析的多种技术进行鉴定与识别，以及二维红外相关分析技术来监控药物的稳定性等方法。从而可以不失源本性、无损地、简便、快捷，无需进行分离过程便直接测试，不破坏中药的配伍性，即可获取中药的整体信息，并以此来鉴定、鉴别中药。这被称作为宏观指纹法。
为了能整体地、无损地、不需要分离提取、试样处理简单、测定快速简便地、正确地鉴定、鉴别中药注射剂并使之规范化，本发明提出采用的红外光谱法，包括测定试样的常规红外光谱图、导数光谱图、二维相关红外谱为一体的多级宏观指纹鉴定法。通过此法获得不失试样原本性，配伍性的宏观的指纹信息，因此更具有直观性。它符合中医药辩证施治原则。此外还可以同时获取药品稳定性和变质机理的信息。并且便于推广。
本发明基于这样的原理，即物质的红外光谱图具有指纹性可作为一级谱图进行对比鉴定，当极其相似的物质可能其差异性仍然不够明显时，可借助其导数光谱，作为二级谱图进行对比，进一步检验出较为微小的差异，当上述两级谱图的差异仍不足以区别与鉴定时，可以进一步用分辨率更高的二维红外相关谱图进行对比鉴定。从而可非常直观地进行鉴定、鉴别与质量控制。采用本发明提出的中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法无需对试样进行分离，就可无损地、非破坏性地、快速地、简便地、不失原本性、不失配伍性地、直观地鉴定中药注射剂及其质量。这是一个符合中医中药学的辩证施治原则的根本方法。它的建立与推广将大大加速中药质控进程，大大加速中药现代化和国际化的速度。
图2a、2b为实施例中清开灵注射剂的导数谱图(神威药业，批次0164142)。
图3a、3b为实施例中清开灵注射剂的二维相关等位线谱图(神威药业，批次0164142)。
图4a、4b为实施例中清开灵注射剂的二维相关鱼网图(神威药业，批次0164142)。
图5为实施例中清开灵注射剂的红外谱图(神威药业，批次9811112)。
图6a、6b为实施例中清开灵注射剂的导数谱图(神威药业，批次9811112)。
图7a、7b为实施例中清开灵注射剂的二维相关等位线谱图(神威药业，批次9811112)。
图8a、8b为实施例中清开灵注射剂的二维相关鱼网图(神威药业，批次9811112)。
图9为实施例中清开灵注射剂的红外谱图(广东永康，批次0011308)。


图10a、10b为实施例中清开灵注射剂的导数谱图(广东永康，批次0011308)。
图11a、11b为实施例中清开灵注射剂的二维相关等位线谱图(广东永康，批次0011308)。
图12a、12b为实施例中清开灵注射剂的二维相关鱼网图(广东永康，批次0011308)。
图13为实施例中三种清开灵注射剂的红外谱图对比分析。
图14a、14b为实施例中三种清开灵注射剂的导数谱图对比分析。
图15为实施例中三种清开灵注射剂的二维相关等位线谱图对比分析。
图16为实施例中黄芪注射剂的红外谱图。
图17a、17b为实施例中黄芪注射剂的导数谱图。
图18a、18b为实施例中黄芪注射剂的二维相关等位线谱图。
图19a、19b为实施例中黄芪注射剂的二维相关鱼网图。
注倘若生产的药品具有标准试样(已经临床使用证实有效的试样(标准物))，则应以其中红外谱图及其导数谱图和热微扰的同步二维相关谱图(等强度图和立体鱼网图)作为参照基准，被测试样的各级谱图进行对比便可鉴定、鉴别和质量控制。注射剂 IR(主峰；副峰)/cm-1导数(主峰；副峰)/cm-12D(主峰，簇峰)/cm-1神威1623，1407，1050； 1632，1410，1045；1465， 1582，1417；10550164142 1460，1357，1108 1113，994神威1619，1408，1050； 1632，1410，1046；1465， 1585，1416；10569811112 1463，1357，1109 1113， 994永康1625，1407，1061； 1632，1411，1041；1450， 1570，1560，1418；10620011308 1450，1333 1104，980黄芪1626，1405，1074，1452 1628，1411，1044，1079； 1640(负交叉峰)，1592，与1042 1458，1164，1125 1422；1049从表可见，清开灵与黄芪注射剂无论从IR图形总体，主峰、副峰(包括导数谱的)峰位，及它们的相对强度，以及2D相关谱都有一定的区别，显然其2D谱的差别更明显。可以看到同一厂家不同批次的清开灵的区别远远比不同厂家的清开灵的区别要小得多。由此可鉴别不同种注射剂，不同厂家，同厂家不同批次的药品。
权利要求
1.一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤(1)冷冻和真空除去试样中的溶剂；(2)上述脱去溶剂的试样用溴化钾压片制样；(3)测定试样的普通红外光谱、漫反射近红外、漫反射中红外光谱、反射光谱及衰减全反射光谱；(4)求出并绘出上述相应红外光谱图的二阶导数谱；(5)测定压片试样的二维相关红外谱，产生它的可以是任何形式的扰动；(6)分级对比相应图谱，即可直接构成中药注射剂的非分离提取鉴定、鉴别。
2.根据权利要求1所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于步骤(1)所述的冷冻时所采用的冷冻剂为冰、干冰、液态空气、液态氮气。
3.根据权利要求1所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于步骤(5)所述的二维相关红外谱可以是同步谱，异步谱或两者兼用。
4.根据权利要求1所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于步骤(5)所述的二维相关红外谱可以是各种形式的图象，优选为等强度图、鱼网图，多维立体图，彩色图。
5.根据权利要求1所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于步骤(5)所述的扰动形式为热、光、电、磁、机械力的扰动。
6.根据权利要求1所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于步骤(6)所述的分级对比可以是三种红外谱图单独地，或者将两者结合在一起地，或者将三者结合在一起相互对比。
7.根据权利要求1或6所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于所述分级对比为一级、二级、三级对比。
8.根据权利要求1或6或7所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于，所述分级对比中的一级对比为(1)观察图谱总体形状或形貌，即峰位、峰强度、峰形的相似性来初步鉴别；(2)在1800～400cm-1区间内选取3～5个最强谱峰，其峰位波动±2cm-1之内，视为相同或相近。并且比较各强峰之间的相对强度(比)的大小和次序；(3)在1800～400cm-1区间内选取3～5个次强谱峰，其峰位波动在±2cm-1之内，视为相同或相近为辅来鉴别。
9.根据权利要求1或6或7所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于，所述分级对比中的二级对比为(1)观察图谱总体形状或形貌，即峰位、峰强度、峰形的相似性来初步鉴别；(2)在1800～400cm-1区间内选取上述最强谱峰峰位就近的导数峰视为相同或相近，其峰位波动在±2cm-1之内，并且比较各强峰之间的相对强度的大小和次序；(3)在1800～400cm-1区间内选取上述最强谱峰的肩峰峰位出现与否来鉴别，其峰位波动在±2cm-1之内。
10.根据权利要求1或6或7所述的一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，其特征在于，所述分级对比中的三级对比为用二维相关谱进行对比来判断，选取同步相关谱中的强峰或强峰簇的自动峰峰位及其强度，以及所选取的自动峰与其它自动峰之间的交叉峰的正负号的异同来鉴别它们的异同。
全文摘要
本发明涉及一种中药注射剂红外光谱非分离提取多级宏观指纹鉴定方法，属于中药检测技术领域。该方法包括的步骤为冷冻和真空除去试样中的溶剂；脱去溶剂的试样用溴化钾压片制样；测定粉末样品的压片试样的普通红外光谱、漫反射近红外、漫反射中红外光谱、反射光谱及衰减全反射光谱；求出并绘出相应光谱图的二阶导数光谱图；测定试样的二维相关红外谱；分级对比相应图谱。本方法无需对试样进行分离，即可无损地、非破坏性地、快速地、简便地、不失原本性、不失配伍性地、直观地鉴定中药注射剂及其质量。此外该方法还可以同时获取药品稳定性和变质机理的信息，便于推广应用，从而可加速中药质量控制进程，大大加速中药现代化。
文档编号G01N21/35GK1432803SQ0310476
公开日2003年7月30日 申请日期2003年2月28日 优先权日2003年2月28日
发明者孙素琴, 周群, 秦竹 申请人:清华大学