专利名称：一种人少突神经胶质瘤标志物map2蛋白及其用途的制作方法
技术领域：
本发明属生物技术和医学领域。涉及人少突神经胶质瘤标志物，具体涉及一种能区分临床上具有化疗敏感的、IP等位基因杂合性缺失(lp Lossofheterozygosity, Ip LOH)的人少突神经胶质瘤(Oligoden droglioma, OG)的蛋白标志物MAP2蛋白 (microtubuleassociated protein 2, MAP2)及其用途。
背景技术：
生物标志物(biomarker)是指能被客观测量的，指示正常生理或病理过程，或是机体对于药物反应的物理、化学、生物指标。现代肿瘤研究的最关键的问题之一，就是寻找早期检测，诊断分型，治疗监测和预后，以及作为药物靶标的标志物。研究揭示了细胞从正常状态转变为肿瘤的过程中，细胞内蛋白表达谱会发生一系列变化。肿瘤标志物就是在肿瘤发生和发展过程中，由肿瘤细胞合成释放或宿主对肿瘤反应性释放的一类物质。它们具有一定的特异性与灵敏度，可以用作诊断与治疗中的监测指标。少突神经胶质瘤属神经胶质瘤，占原发性脑肿瘤的2-5%，占脑胶质瘤的4-15%。 据研究报道，肿瘤组织中Ip (或Ip和19q)等位基因缺失的病人，对化疗反应敏感，并有良好的预后，而不含Ip等位基因缺失的病人对化疗反应不敏感，相对预后较差。自1998年始， 有研究针对少突神经胶质瘤患者的有关Ip等位基因缺失的分子机制，利用候选基因、基因组和蛋白质组的各种方法进行了若干尝试分析，但仍未揭示出Ip等位基因缺失患者的化疗敏感性机制，也未能利用生物标志物来作为预测Ip等位基因缺失的状态和化疗敏感性。 目前常用的Ip等位缺失的检测方法有FISH (荧光原位杂交)和微卫星DNA法，所述方法需要特殊的设备和技术，而且往往过程繁琐，费用昂贵，其中，微卫星DNA法更是需要除患者肿瘤组织样品以外的病人基因组DNA(病人血中获得)，引入了更多的收集，处理等繁琐步骤。综上所述，很有必要寻找一种易用于临床检测，可进一步用于预测Ip等位基因缺失，或化疗敏感性的标志物，其将具有重大的临床意义，并可据此研究少突神经胶质瘤Ip 等位基因缺失样品化疗敏感的机制。

发明内容
本发明的目的是为克服现有技术的缺陷，提供一种人少突神经胶质瘤标志物MAP2 蛋白及其用途。该MAP2蛋白可用作人少突神经胶质瘤的蛋白标志物，尤其能用作区分临床上具有化疗敏感的，IP等位基因杂合性缺失的人少突神经胶质瘤的蛋白标志物。该MAP2蛋白可用于准确预测具有90%的IP等位基因杂合性缺失，可用于少突神经胶质瘤Ip缺失样品化疗敏感的机制研究，以及通过决策树模型等方式预测Ip等位基因杂合性缺失的病人的化疗敏感性，为诊断和预后以及治疗提供靶点。本发明的另一个目的是提供一种基于iTRAQ-LC-MS/MS技术的蛋白质组分析蛋白质谱，检测MAP2蛋白的方法。本发明运用8标的iTRAQ结合LC-MS/MS技术分析离体的少突神经胶质瘤样品，获得差异表达的蛋白。本发明的一个实施例中，为能获得高丰度的蛋白，直接采用离体的肿瘤组织为iTRAQ实验的样本，所获得的差异表达的蛋白直接代表肿瘤本身和与化疗肿瘤生物学相关的肿瘤微环境。本发明所述的具有差异表达的差异表达的蛋白，包括如表1所示的一组13种蛋白质，其中优选MAP2蛋白，该MAP2蛋白其分子量为1995^Da。表1是13个侯选差异表达的蛋白。
权利要求
1.一种人少突神经胶质瘤标志物MAP2蛋白，其特征在于，所述的MAP2蛋白其分子量为 199526Da。
2.一种检测人少突神经胶质瘤标志物MAP2蛋白的方法，其特征在于，在完整离体的肿瘤组织中筛选差异蛋白，然后用抗体进行免疫印迹和免疫组化后续验证，获得差异蛋白 MAP2蛋白。
3.按权利要求2所述的方法，其特征在于，其包括步骤1)制备少突神经胶质瘤冰冻标本和石蜡包埋标本，分别将离体的肿瘤标本速冻并于_80°C保存，制备少突神经胶质瘤冰冻标本，组织学评估所述肿瘤组织中肿瘤细胞的含量超过80% ；福尔马林固定和石蜡包埋制得少突神经胶质瘤石蜡包埋标本；2)三色FISH技术分析检测染色体臂Ip上等位基因的缺失用1ρ36微缺失综合症的特异性三色荧光标记探针，检测染色体臂Ip上等位基因的缺失；3)基于iTRAQ-LC-MS/MS技术的蛋白质组分析蛋白质谱，寻找差异蛋白直接采用离体的肿瘤组织获得高丰度的蛋白后，顺序进行蛋白纯化、消化裂解后，再用 iTRAQ试剂进行差异标记及样品混合，离心干燥，色析分离，再经四级杆飞行时间串联质谱进行蛋白质组数据分析，确定Ip缺失和非缺失的少突神经胶质瘤间的差异蛋白；4)免疫印迹和免疫组化检测用Wfestern blot对挑选出的差异蛋白进行验证。
4.MAP2蛋白在制备检测IP等位基因杂合性缺失存在与否的生物标志物中的用途。
5.MAP2蛋白在制备IP等位基因杂合性缺失存在状态的决策树分析模型中的用途。
6.一种检测试剂盒，其特征在于，其含有权利要求1所述的人少突神经胶质瘤标志物 MAP2蛋白。
7.—种诊断Ip等位基因缺失的少突神经胶质瘤化疗敏感性的试剂盒，其特征在于，其含有权利要求1所述的MAP2蛋白。
全文摘要
本发明属生物技术和医学领域。涉及人少突神经胶质瘤标志物，具体涉及一种能区分临床上具有化疗敏感的、1P等位基因杂合性缺失的人少突神经胶质瘤的蛋白标志物MAP2蛋白及其用途。本发明通过iTRAQ-LC-MS/MS技术，确定了能区分临床上具有化疗敏感的，1P缺失的，少突神经胶质瘤的蛋白标志物MAP2蛋白。该MAP2蛋白具有90％的1P缺失预测准确度。该标志物不仅仅可以解释1p等位基因缺失的少突神经胶质瘤样品的化疗敏感的机制，也可以通过决策树模型预测1p等位基因缺失的少突神经胶质瘤病人的化疗敏感性。该MAP2蛋白可进一步制备临床试剂盒，为少突神经胶质瘤的诊断，预后，和治疗提供帮助。
文档编号G01N27/62GK102408478SQ201010290758
公开日2012年4月11日 申请日期2010年9月21日 优先权日2010年9月21日
发明者徐晓恩, 施前, 杨柳松 申请人:复旦大学