专利名称：一种地中海贫血筛查试剂及制备方法和检测筛查方法
技术领域：
本发明涉及一种地中海贫血筛查试剂，本发明还涉及一种制备该地中海贫血筛查试剂的方法。本发明还涉及一种采用该试剂检测筛查地中海贫血的方法，属于生物化学、物理、检验诊断试剂领域。
背景技术：
地中海贫血(Thalassemia)是一组遗传性溶血性疾病，其特点是血红蛋白的珠蛋白肽链中有一种或偶尔几种的合成受到抑制。在我国多见于南方沿海地区如广东、广西、湖南、湖北、四川、浙江、福建和台湾等地区。这种疾病 是由于红细胞内的血红蛋白数量和质量的异常造成红细胞寿命缩短的一种先天性贫血。地中海贫血主要分成两大类，包括a地中海贫血和3地中海贫血，这两类地中海贫血有四个等级，包括重型、中间型、轻型以及基因携带者。现在基因(PCR)确诊地中海贫血的试验操作复杂，费用昂贵，不利于普及。而一管法筛查地中海贫血试剂操作繁琐，且要离心沉淀，完全是手工操作，效力低下。

发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种使用方便，价格相对便宜，检测效果好的地中海贫血筛查试剂。本发明的另一个目的是提供一种制备该地中海贫血筛查试剂的方法。本发明另一个目的是提供一种地中海贫血的检测筛查方法。为了达到上述目的，本发明采用以下方案一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液用蒸馏水稀释10倍所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成
分析纯氯化钠9.000 10.000%
磷酸二氢钾0.210 0.300%;
磷酸氢二钠含12个结晶水3.400 3.600%
蒸馏水86.100 87.390%。如上所述的一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于所述的A液按重量百分比由以下组分组成分析纯氯化钠0.330 0.360%
磷酸二氢钾0.007 0.009%;
磷酸氢二钠含12个结晶水0.115 0.120%
蒸镏水99.480 99.510%。如上所述的一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于所述的B液按重量百分比由以下组分组成
分析纯氯化钠0.900 1.000%
磷酸二氢钾0.021 0.025%;
磷酸氣二钠含12个结晶水0.344 0.360%
蒸馏水98.600 98.740%。如上所述的一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于所述的样本稀释液为医用生理盐水。制备如上所述的地中海贫血筛查试剂的方法，其特征在于包括以下步骤在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，蒸馏水稀释30倍即得试剂A，稀释10倍即得试剂B。一种地中海贫血的检测筛查方法，其特征在于采用权利要求1-3任一种试剂，所述的在试剂全自动生化分析仪使用，试剂A及试剂B参数相同主波长600nm，方法终点法，方向上升反应，K值10000，样品量为15ul，试剂量为200ul，反应时间为5分钟，反应温度为37°C。如上所述的制备方法，其特征在于各步骤均在无菌车间里进行。本发明中组分的分子式、性状及产地(I)分析纯氯化钠分子式NaCl分子量58. 44无色结晶性粉末，无嗅微有潮解性，溶于水，不溶于乙醇(广州番禺力强化工厂)(2)磷酸二氢钾分子式=KH2PO4分子量136. 09无色结晶，无嗅微有潮解性，溶于水，不溶于醇(广州化学试剂厂)(3)磷酸氢二钠(含12结晶水)分子式Na2HPO4. 12H20分子量358. 14无色结晶性，无嗅微有潮解性，溶于水，在干燥空气中易风化(广东台山粤桥化工厂)本发明原理本发明利用地中海贫血患者与正常人的红细胞膜结构差异，在特定均相氯化钠磷酸盐缓冲溶液中正常红细胞被溶解形成吸光度变化与其溶液中的血红蛋白浓度成反比，在全自动生化分析仪中以600nm处测定其在试剂A及试剂B均相缓冲溶液中的吸光度值，计算出A/B比值，此比值的大小与地中海贫血患者严重程度呈正相关关系，因此可利用此比值检测出地中海贫血患者。采用本发明试剂检测可大大减低检验人员的工作强度，操作完全自动化，提高了生物安全等级。本发明更有利于普及普通人群、婚前或产前及新生儿对地中海贫血的筛查，预防或减少地中海贫血婴儿的出生率。本发明填补了市场空白的，开发适应全自生化分析仪的操作程序，创造更大的社会效率。本发明在检验过程中不检测红细胞溶血率，利用全自动生化分析仪600nm波长直接测定红细胞在两种不同氯化钠浓度磷酸盐缓冲溶液中的吸光度，然后直接计算比值。本发明不受患者贫血、黄疸、混浊程度的影响，试剂2 8°C下贮藏质量稳定时间可达一年。
具体实施方式
。下面结合具体实施方式
对本发明做进一步描述 实施例I 本发明地中海贫血筛查试剂，包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液用蒸馏水稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成
分析纯氯化钠9.000%
磷酸二氢钾0.210%;
磷酸氢二钠含12个结晶水3.400%
蒸馏水87.390%。在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，用蒸馏水稀释30倍即得试剂A，稀释10倍即得试剂B。具体可以采用以下做法取母液250ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂A，取母液750ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂B。样本所用稀释液为医用生理盐水500ml/瓶，直接使用无须配制。做成产品用量筒或灌装设备将试剂A灌装成50ml/瓶备用，将试剂B灌装成50ml/瓶备用，要求配制过程及分装过程均在无菌车间里进行，分装后放置2 8°C保存。实施例2本发明地中海贫血筛查试剂，包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液用蒸馏水稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成分析纯氯化钠10.000%
磷酸二氢钾0.300%;
磷酸氢二钠含12个结晶水3.600%
蒸馏水86.100%。在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，用蒸馏水稀释30倍即得试剂A，用蒸馏水稀释10倍即得试剂B。具体可以采用以下做法取母液250ml加入蒸懼水至7500ml搅拌均勻后为试剂A,取母液750ml加入蒸懼水至7500ml搅拌均匀后为试剂B。样本所用稀释液为医用生理盐水500ml/瓶，直接使用无须配制。做成产品用量筒或灌装设备将试剂A灌装成50ml/瓶备用，将试剂B灌装成 50ml/瓶备用，要求配制过程及分装过程均在无菌车间里进行，分装后放置2 8°C保存。实施例3本发明地中海贫血筛查试剂，包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液用蒸馏水稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成
分析纯氯化钠9.500%
磷酸二氢钾0.250%；
磷酸氢二钠含12个结晶水3.500%
蒸馏水86.750%。在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，用蒸馏水稀释30倍即得试剂A，稀释10倍即得试剂B。具体可以采用以下做法取母液250ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂A，取母液750ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂B。样本所用稀释液为医用生理盐水500ml/瓶，直接使用无须配制。做成产品用量筒或灌装设备将试剂A灌装成50ml/瓶备用，将试剂B灌装成50ml/瓶备用，要求配制过程及分装过程均在无菌车间里进行，分装后放置2 8°C保存。实施例4本发明地中海贫血筛查试剂，包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液用蒸馏水稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成分析纯氯化钠9.200%
磷酸二氢钾0.270%;
磷酸氢二钠含12个结晶水3.450%
蒸馏水87.08%。在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，用蒸馏水稀释30倍即得试剂A，稀释10倍即得试剂B。具体可以采用以下做法取母液250ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂A，取母液750ml加入蒸馏水至7500ml 搅拌均匀后为试剂B。样本所用稀释液为医用生理盐水500ml/瓶，直接使用无须配制。做成产品用量筒或灌装设备将试剂A灌装成50ml/瓶备用，将试剂B灌装成 50ml/瓶备用，要求配制过程及分装过程均在无菌车间里进行，分装后放置2 8°C保存。实施例5本发明地中海贫血筛查试剂，包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液用蒸馏水稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成
分析纯氯化钠9.650%
磷酸二氢钾0.280%;
磷酸氢二钠含12个结晶水3.530%
蒸馏水86.540%。在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，用蒸馏水稀释30倍即得试剂A，稀释10倍即得试剂B。具体可以采用以下做法取母液250ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂A，取母液750ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂B。样本所用稀释液为医用生理盐水500ml/瓶，直接使用无须配制。做成产品用量筒或灌装设备将试剂A灌装成50ml/瓶备用，将试剂B灌装成50ml/瓶备用，要求配制过程及分装过程均在无菌车间里进行，分装后放置2 8°C保存。实施例6本发明地中海贫血筛查试剂，包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成分析纯氯化钠9.800%
磷酸二氢钾0.285%;
磷酸氢二钠含12个结晶水3.570%
蒸馏水86.345%。在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，用蒸馏水稀释30倍即得试剂A，稀释10倍即得试剂B。具体可以采用以下做法取母液250ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂A，取母液750ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂B。样本所用稀释液为医用生理盐水500ml/瓶，直接使用无须配制。做成产品用量筒或灌装设备将试剂A灌装成50ml/瓶备用，将试剂B灌装成 50ml/瓶备用，要求配制过程及分装过程均在无菌车间里进行，分装后放置2 8°C保存。实施例7本发明地中海贫血筛查试剂，包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成
分析纯氯化钠9.930%
磷酸二氢钾0.270%;
磷酸氢二钠含12个结晶水3.530%
蒸馏水86.27%。在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，用蒸馏水稀释30倍即得试剂A，稀释10倍即得试剂B。具体可以采用以下做法取母液250ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂A，取母液750ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂B。样本所用稀释液为医用生理盐水500ml/瓶，直接使用无须配制。做成产品用量筒或灌装设备将试剂A灌装成50ml/瓶备用，将试剂B灌装成50ml/瓶备用，要求配制过程及分装过程均在无菌车间里进行，分装后放置2 8°C保存。实施例8本发明地中海贫血筛查试剂，包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成
分析纯氯化钠9.30%

磷酸二氢钾0.240%;
磷酸氢二钠含12个结晶水3.430%
蒸馏水87.03% o在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，用蒸馏水稀释30倍即得试剂A，稀释10倍即得试剂B。具体可以采用以下做法取母液250ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后 为试剂A，取母液750ml加入蒸馏水至7500ml搅拌均匀后为试剂B。样本所用稀释液为医用生理盐水500ml/瓶，直接使用无须配制。做成产品用量筒或灌装设备将试剂A灌装成50ml/瓶备用，将试剂B灌装成50ml/瓶备用，要求配制过程及分装过程均在无菌车间里进行，分装后放置2 8°C保存。采用比值法测定地中海贫血患者是采用本发明的地中海贫血筛查试剂来进行的，检测步骤如下一、样品米集和处理用肝素管抽血lml，样本室温可稳定12小时，2 8°C可稳定48小时。往小玻璃试管内加入Iml生理盐水，再加入全血30ul或压积红细胞20ul，充分混匀后5分钟内上机测定 二、仪器参数A/B两项试验参数设定相同温度37°C,主波长600nm,付波长无,测定方法为一点终点，测定时间5分钟，K值为10000，上升反应，样品用量15ul，A/B项试剂用量为200ul，水+试剂调零为试剂空值。三、计算A项吸光度值/B项吸光度值参考范围成人0. 0 0. 32新生儿/脐带血0.0 0.37采用本发明检测成人地贫与非地贫与现有的一管法的比较(地贫和非地贫受检者由PCR确诊证实)表I采用本发明检测成人地中海贫血结果
本法地贫患者非地贫受检者合计
阳性16010170明性25165190 合计 185 175 360
敏感度86.5%特异度94.3%正确率90.3%表2 —管法检测成人地中海贫血结果
权利要求
1.一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液用蒸馏水稀释10所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成分析纯氯化钠9.000 10.000%磷酸二氢钾0.210 0.300%;磷酸氢二钠含12个结晶水3.400 3.600%蒸馏水86.100 87.390%。
2.根据权利要求I所述的一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于所述的A液按重量百分比由以下组分组成分析纯氯化钠0.330 0.360% 磷酸. 钾0.007 0.009%； 磷酸氢二钠含12个结晶水0.115 —0.120%蒸馏水99.480 99.510%。
3.根据权利要求I所述的一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于所述的B液按重量百分比由以下组分组成分析纯氯化钠0.900 1.000%磷酸二氢钾0.021 0.025%;磷酸氢二钠含12个结晶水0.344 0.360%蒸馏水98.600 98.740%。
4.根据权利要求I至3所述的任一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于还包括有样本稀释液。
5.根据权利要求4所述的一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于所述的样本稀释液为医用生理盐水。
6.制备权利要求I至3所述的任一种地中海贫血筛查试剂的方法，其特征在于包括以下步骤 在洁净的玻璃容器中按比例加入分析纯氯化钠，磷酸二氢钾，磷酸氢二钠含十二个结晶水，加入部分蒸馏水，然后搅拌溶解，最后加入余量的蒸馏水，制得母液，分别取母液各一份，蒸馏水稀释30倍即得试剂A，蒸馏水稀释10倍即得试剂B。
7.根据权利要求6所述的制备方法，其特征在于各步骤均在无菌车间里进行。
8.—种地中海贫血的检测筛查方法，其特征在于采用权利要求1-3任一种试剂，所述的试剂在全自动生化分析仪使用，试剂A及试剂B参数相同主波长600nm，方法终点法，方向上升反应，K值10000，样品量为15ul，试剂量为200ul，反应时间为5分钟，反应温度为37℃。
全文摘要
本发明公开了一种地中海贫血筛查试剂，其特征在于包括有试剂A和试剂B，所述的试剂A由母液用蒸馏水稀释30倍所得，所述的试剂B由母液用蒸馏水稀释10倍所得，其中所述的母液按重量百分比由以下组分组成分析纯氯化钠9.000～10.000%；磷酸二氢钾0.210～0.300%；磷酸氢二钠含12个结晶水3.400～3.600%；蒸馏水86.100～87.390%。本发明的目的是为了克服现有技术中的不足之处，提供一种使用方便，价格相对便宜，检测效果好的地中海贫血筛查试剂。本发明的另一个目的是提供一种制备该地中海贫血筛查试剂的方法。本发明另一个目的是提供一种地中海贫血的检测筛查方法。
文档编号G01N21/77GK102721682SQ20121021602
公开日2012年10月10日 申请日期2012年6月27日 优先权日2012年6月27日
发明者黄文东 申请人:黄文东