专利名称：一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法
技术领域：
本发明属于中药检测技术领域，尤其涉及一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法。
背景技术：
Caco-2细胞模型(the human colon carcinoma cell line)是一种人结肠腺癌细胞体外培养模型，Caco-2细胞可在培养条件下自发进行上皮样分化并可以形成紧密联结，分化出绒毛面AP (apical，肠腔侧)和基底面BL (basolateral，肠壁侧)，其形态学、标志酶的功能表达、渗透特征等与小肠上皮细胞相似，因此可以作为研究小肠表皮细胞的药物转运、吸收和代谢的体外模型。Caco-2单层细胞模型被认为是研究口服药物在小肠吸收转运的较好的体外模型，其与药物在肠中的吸收具有良好的相关性、重现性及适用性，已被美国食品和药物管理局(Food and Drug Administration, FDA)批准使用进行药物筛选。如，Artursson P等(Artursson P, Karlsson J., Correlation between oraldrug absorbtion in humanand apparent drug permeability coefficients in humanintestinal epithelialcells[J]， biochem Biophys Res Communication,1991,175(3) :880 885)用 Caco-2 细胞模型研究了属被动扩散的20种不同结构的药物吸收机制，通过小肠表皮细胞的吸收，测定了这些药物的表观通透系数(Apparentpermeability coefficient, Papp)，发现 Caco-2细胞模型所得结果与人体吸收程度的对应关系为=Papp值大于1*10_6时，药物完全吸收；Paap值在(0. 1 1.0)*10_6之间时，药物吸收介于 100%，Paap值小于1*10_7时，药物吸收小于 ；Yee S(Yee S, In vitro permeability across Caco-2 cells can predictin vivo(smallintestinal)absorption in manfact or myth[J], Phamaceut Res,1997,14(6) 763 766)利用Caco-2细胞模型研究了在人体具有不同吸收程度的35种化合物，并分别测定了其Papp，发现该系数与人体吸收相关程度良好。附子(Radix Aconiti Lateralis Preparata)为毛茛科乌头属植物川乌头的侧根，是中医临床常用中药，性味甘、辛、大热有毒，具有镇痛、消炎、强心和抗癌等广泛的药理作用，被认为是中药中的“回阳救逆第一品”。附子的主要化学成分是二萜类生物碱，主要包括双酯型生物碱、单酯型生物碱和醇胺型生物碱，如塔拉乌头胺(talatizamine)、新乌宁碱(neoline)、附子宁碱(fuziline)、14-苯甲酰次乌头胺(14-benzoylhypaconine)、14-苯甲酰中乌头胺(14-benzoylmesaconine)、次乌头碱(hypaconitine)、去氧乌头碱(deoxyaconitine)、中乌头碱(mesaconitine)、乌头碱(aconitine) > 10-轻基-中乌头碱(10-0H-mesaconitine)和 10-羟基-乌头碱(lO-OH-aconitine)等。利用Caco-2细胞模型对附子中的二萜类生物碱进行吸收转运实验时，需要对其吸收转运含量进行检测，而现有的检测方法并不适用于含有11种以上的生物碱的附子。

发明内容
有鉴于此，本发明要解决的技术问题在于提供一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法，本发明提供的检测方法能够检测附子中11种生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量，操作简便、检测结果准确、灵敏度高。本发明提供了一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法，包括以下步骤a)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；b)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，将得到的溶液作为供给侧、Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧在Caco-2细胞模型中进行吸收转运，自接收侧取样，得到待测样品；C)以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对所述待测样品进行分离检测，得到质谱图；d)根据所述质谱图和预先建立的标准工作曲线得到各生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量。优选的，所述步骤a)具体包括将附子粉末浸泡于乙醇中，超声提取并浓缩后，得到浸膏；将所述浸膏溶解于乙醇中，抽滤，将得到的滤液真空干燥后得到生物碱提取物。优选的，所述超声提取的温度为20°C 30°C。优选的，所述超声提取的时间为Ih 池。优选的，所述Hanks平衡盐缓冲液的pH值为7 8。优选的，所述步骤b)具体包括以下步骤bl)将Caco-2细胞接种于培养板上，培养后得到Caco-2细胞模型；b2)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，得到生物碱提取物溶液；b3)向所述Caco-2细胞模型的绒毛面加入所述生物碱提取物溶液作为供给侧，同时向所述Caco-2细胞模型的基底面加入Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧；或者，向所述Caco-2细胞模型的基底面加入所述生物碱提取物溶液作为供给侧，同时向所述Caco-2细胞模型的绒毛面加入Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧；b4)将步骤b3)得到的Caco-2细胞模型置于振荡培养箱中，于培养20min、40min、60min、90min和120min时自接收侧取样，冷冻干燥后得到待测样品；每次取样结束后，补加等量的Hanks平衡盐缓冲液。优选的，所述振荡培养箱的温度为35°C 40°C。优选的，所述振荡培养箱的振荡速度为1转/s 3转/S。优选的，所述步骤C)具体包括以下步骤cl)将所述待测样品溶解于甲醇、乙腈和水的混合溶液中，得到待测溶液；c2)向所述待测溶液中加入利血平，然后采用超高效液相色谱仪和质谱仪进行分离检测，得到质谱图。优选的，所述步骤d)中的标准工作曲线按照以下方法建立dl)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；d2)以经过Caco-2细胞孵育的Hanks平衡盐缓冲液为溶剂，配制不同浓度的生物碱提取物溶液，以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪分别对所述生物碱提取物溶液进行分离检测，获得质谱图；d3)根据所述生物碱提取物溶液的浓度和所述质谱图建立各生物碱的标准工作曲线。与现有技术相比，本发明首先提取附子中的生物碱，得到生物碱提取物；然后将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，将得到的溶液作为供给侧、Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧在Caco-2细胞模型中进行吸收转运，自接收侧取样，得到待测样品；以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对所述待测样品进行分离检测，得到质谱图；根据所述质谱图和预先建立的标准工作曲线得到各生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量。其中，超高效液相色谱仪对复杂样品的分离效果较好，而质谱仪则具有较高的灵敏度和精确性，不受指纹图谱、无机盐等因素的干扰，使得检测结果更为准确。实验结果表明，本发明提供的方法能够检测附子中11种生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运的含量，而且检测灵敏度高、结果准确，不受五味子、干姜等提取物的影响。根据对附子中11种生物碱在Caco-2细胞中吸收转运含量的测定结果，可以判断附子中各生物碱在人体内的吸收情况，从而提高对附子的利用率。


图1为对本发明实施例1提供的20min时获取的待测样品进行分离检测的总离子流图；图2为本发明实施例1提供的待测样品中次乌头碱的含量与时间的曲线图。
具体实施例方式本发明提供了一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法，包括以下步骤a)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；b)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，将得到的溶液作为供给侧、Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧在Caco-2细胞模型中进行吸收转运，自接收侧取样，得到待测样品；c)以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对所述待测样品进行分离检测，得到质谱图；d)根据所述质谱图和预先建立的标准工作曲线得到各生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量。本发明将超高效液相色谱仪和质谱仪联用对附子中的二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运的含量进行检测，其中，超高效液相色谱仪的分离效果较好，本发明中，能够分离得到11种二萜类生物碱；将生物碱分离后，采用灵敏度和精确度较高的质谱仪对其进行分析，分析结果较为准确，而且不受无机盐等离子或五味子提取物、干姜提取物等药物的影响。首先提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物，优选按照以下方法提取将附子粉末浸泡于乙醇中，超声提取并浓缩后，得到浸膏；
将所述浸膏溶解于乙醇中，抽滤，将得到的滤液真空干燥后得到生物碱提取物。将附子研磨成粉，浸泡于乙醇中进行超声提取，所述乙醇优选为90% 95%的乙醇，所述乙醇的体积优选为附子粉末体积的6 8倍。进行超声提取时，超声提取的温度优选为20°C 30°C，更优选为25°C ；超声提取的时间优选为Ih 3h，更优选为池。优选将所述附子提取两次，并将提取液合并，浓缩成浸膏。将所述浸膏溶解于乙醇中，抽滤除去不溶物质，真空干燥后得到生物碱提取物。所述乙醇优选为无水乙醇，所述乙醇与所述浸膏的体积比优选为2 15 1，更优选为5 10 1。将所述浸膏多次溶解于乙醇中，抽滤、真空干燥，得到纯度较高的生物碱提取物。得到生物碱提取物后，将所述生物碱在Caco-2细胞模型中进行吸收转运实验，以便获得待测样品，具体包括以下步骤bl)将Caco-2细胞接种于培养板上，培养后得到Caco-2细胞模型；b2)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，得到生物碱提取物溶液；b3)向所述Caco-2细胞模型的绒毛面加入所述生物碱提取物溶液作为供给侧，同时向所述Caco-2细胞模型的基底面加入Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧；或者，向所述Caco-2细胞模型的基底面加入所述生物碱提取物溶液作为供给侧，同时向所述Caco-2细胞模型的绒毛面加入Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧；b4)将步骤b3)得到的Caco-2细胞模型置于振荡培养箱中，于培养20min、40min、60min、90min和120min时自接收侧取样，冷冻干燥后得到待测样品；每次取样结束后，补加等量的Hanks平衡盐缓冲液。得到生物碱提取物后，将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，得到生物碱提取物溶液。所述Hanks平衡盐缓冲液的pH值优选为7 8，更优选为7. 4。本发明对所述生物碱提取物溶液的浓度没有特殊限制，优选为0. 2mg/L 0. 5mg/L。在进行吸收转运实验前，本发明优选以0. 22 μ m的无菌过滤器对所述溶液进行过滤除菌。将Caco-2细胞接种于培养板上，培养后得到Caco-2细胞模型。所述接种密度优选为l*105/mL 6*105/mL，更优选为2*105/mL 5*105/mL ；所述培养板优选为12孔Transwel 1 (NO. 3401 ；Costar，Corning, NY)培养板；所述培养时间优选为20天 25天，更优选为21天。培养完毕后得到Caco-2细胞模型，利用本领域技术人员熟知的方法对所述细胞模型进行评价，评价合格的Caco-2细胞模型即可用于吸收转运实验。Caco-2细胞模型可以用于吸收转运实验，也可用于外排转运实验当用于吸收转运实验时，向所述Caco-2细胞模型的绒毛面(AP)加入所述生物碱提取物溶液作为供给侧，同时向所述Caco-2细胞模型的基底面(BL)加入Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧；当用于外排转运实验时，向所述Caco-2细胞模型的基底面(BL)加入所述生物碱提取物溶液作为供给侧，同时向所述Caco-2细胞模型的绒毛面(AP)加入Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧。在进行吸收转运实验或排外转运实验时，所述基底面(BL)加入的溶液的体积与所述绒毛面(AP)加入的溶液的体积比优选为2 4 1，更优选为3 1。向所述Caco-2细胞模型中加入所述生物碱提取物溶液后，将所述Caco-2细胞模型置于振荡培养箱中，于培养20min、40min、60min、90min和120min时自接收侧取样，冷冻干燥后得到待测样品；每次取样结束后，补加等量的Hanks平衡盐缓冲液。所述振荡培养箱的温度优选为35°C 40°C，更优选为37°C;所述振荡培养箱的振荡速度优选为1转/s 3转/s，更优选为1转/S。在振荡培养的过程中，待测溶液中的生物碱会由供给侧吸收转运或外排转运至接收侧，分别于培养20min、40min、60min、90min和120min时自接收侧取样，取样的体积优选为100 μ L 150 μ L，每次取样结束后，向所述接收侧补足相同体积的Hanks平衡盐缓冲液。取样后，将所述样品溶液进行本领域技术人员熟知的冷冻干燥后，得到待测样品。该待测样品即为附子中生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运或外排转运后得到的待测样品。得到待测样品后，以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对其进行分离检测，得到质谱图，具体过程如下cl)将所述待测样品溶解于甲醇、乙腈和水的混合溶液中，得到待测溶液；c2)向所述待测溶液中加入利血平，然后采用超高效液相色谱仪和质谱仪进行分离检测，得到质谱图。得到待测样品后，将所述待测样品溶解于甲醇、乙腈和水的混合溶液中，得到待测溶液。所述甲醇、乙腈和水的体积比优选为1 2 1 2 2 4，更优选为1 1 2。为了使得到的结果更为准确，本发明以利血平作为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对所述待测溶液进行分离检测，得到质谱图。加入利血平后，得到的溶液中的利血平的浓度优选为300 μ g/L 600 μ g/L，更优选为400 μ g/L 55 μ g/L ；所述超高效液相色谱仪的检测条件优选为超高效液相色谱仪型号Waters ACQUITY ；色谱柱:WatersAcquity uplc BEH C18 色谱柱(50 毫米 X 2. 1 毫米，1. 7 微米，美国)；流动相A为体积比为50 50的乙腈与甲醇的混合液；流动相B为35mmol/L的乙酸铵溶液，所述乙酸铵溶液用氨水调节pH值至10. 5 ；样品溶液流速0. 3mL/min ；柱温35°C；梯度0 lmin，流动相A为90% -57% ;1 2min，流动相A为57% -45% ;2 4. 5min，流动相 A 为 45% -0% ；所述质谱仪的检测条件优选为质谱仪型号WatersXevo TQ ；ESI离子源，正离子模式；喷雾电压2.5kV;脱溶剂气温度为350°C的N2 ；去溶剂气流速700L/h ；锥孔气流速50L/h ；碰撞气流速为0. 15mL/min的Ar ；离子源温度120°C。经过超高效液相色谱仪后，附子中的二萜类生物碱被分离开来；然后经过质谱仪检测，得到质谱图；根据得到的质谱图和预先建立的标准工作曲线可得到各生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量。按照本发明，所述标准工作曲线优选按照以下方法建立
dl)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；d2)以经过Caco-2细胞孵育的Hanks平衡盐缓冲液为溶剂，配制不同浓度的生物碱提取物溶液，以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪分别对所述生物碱提取物溶液进行分离检测，获得质谱图；d3)根据所述生物碱提取物溶液的浓度和所述质谱图建立各生物碱的标准工作曲线。首先按照上文所述的方法提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；将Hanks平衡盐缓冲液按照本领域技术人员熟知的方法经过Caco-2细胞孵育后，作为溶剂配制不同浓度的生物碱提取物溶液，所述浓度范围优选为100μ g/L 15000 μ g/L，更优选为300 μ g/L 10000 μ g/L。分别向所述生物碱提取物溶液中加入利血平作为内标物，加入所述利血平后，所述利血平的浓度与上文所述的利血平浓度一致。采用超高效液相色谱仪和质谱仪分别对所述加入利血平后得到的溶液进行分离检测，得到质谱图。超高效液相色谱仪和质谱仪的工作参数与上文所述的工作参数相同。根据所述生物碱提取物的浓度和其相应的质谱图建立各生物碱的标准工作曲线，具体而言，以生物碱提取物的浓度为横坐标、以质谱图中各生物碱的峰面积与利血平的峰面积的比值为纵坐标，分别绘制各生物碱的标准工作曲线，得到各生物碱的标准工作曲线。得到待测样品的质谱图后，根据各生物碱的峰面积与利血平的峰面积的比值和上述标准工作曲线可以得知总生物碱浓度，进而判断各生物碱的相对浓度，从而得知各生物碱在Caco-2细胞中吸收转运情况。超高效液相色谱仪具有较强的分离能力，将经过Caco-2细胞转运的生物碱分离开来；质谱仪具有灵敏度高、分析结果准确，不受无机盐、其他药物等干扰；超高效液相色谱仪和质谱仪联用进行分析检测的结果较为准确。实验表明，本发明提供的方法能够检测附子中11种生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运的含量，而且检测灵敏度高、结果准确，不受五味子、干姜等提取物的影响。根据对附子中11种生物碱在Caco-2细胞中吸收转运含量的测定结果，可以判断附子中各生物碱在人体内的吸收情况，从而提高对附子的利用率。对所述待测样品进行分离检测后，根据得到的质谱图和预先建立的标准工作曲线分别计算各生物碱的表观渗透系数Papp，进而分别判断附子中各类生物碱在人体中的吸收情况。以次乌头碱为例，表观渗透系数Papp的计算方法具体如下Papp = k · A · C0其中，A为培养板的膜面积，为常数，其单位为cm2 ；C0为次乌头碱在Caco-2细胞模型中吸收转运的初始浓度；k= Δ Q/At，其中，At为转运时间，Δ Q为次乌头碱在At内的转运量。计算得到各生物碱的表观渗透系数Papp后，即可判断人体对该生物碱的吸收程度。为了进一步说明本发明，以下结合实施例对本发明提供的检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法进行详细描述。以下各实施例中所用原料均为从市场上购得。实施例11. 1生物碱的提取
将附子药材粉末用相当于其体积8倍量的体积浓度为95%的乙醇在25°C下超声提取池，提取两次，合并提取液并浓缩成浸膏；用相当于所述浸膏体积5 10倍量的无水乙醇多次溶解浸膏、抽滤除去不溶物质，真空干燥后得到附子中二萜类生物碱的提取物；1. 2标准工作曲线的建立以经过Caco-2细胞孵育的HBSS缓冲盐溶液为溶液，分别配制300 μ g/L、500 μ g/L、1000y g/L、3000y g/L、6000y g/L、8000y g/L 和 10000 μ g/L 的生物碱提取物溶液，分别向各生物碱提取物溶液中加入利血平作为内标物，使利血平的浓度为500μ g/L，采用超高效液相色谱仪和质谱仪进行分离检测，其中，超高效液相色谱仪的检测条件如下超高效液相色谱仪型号Waters ACQUITY ；色谱柱WatersAcquity uplc BEH C18 色谱柱(50 毫米 X 2. 1 毫米，1. 7 微米，美国)；流动相A为体积比为50 50的乙腈与甲醇的混合液；流动相B为35mmol/L的乙酸铵溶液，所述乙酸铵溶液用氨水调节pH值至10. 5 ；样品溶液流速0. 3mL/min ；柱温35°C；梯度0 lmin，流动相A为90% -57% ；1 2min，流动相A为57% -45% ；2 4. 5min，流动相 A 为 45% -0% ；质谱仪检测条件如下质谱仪型号WatersXevo TQ ；ESI离子源，正离子模式；喷雾电压2.5kV;脱溶剂气温度为350°C的N2 ；去溶剂气流速700L/h ；锥孔气流速50L/h;碰撞气流速为0. 15mL/min的Ar ；离子源温度120°C;在进行分离检测时，分离得到了 11种生物碱，以生物碱提取物溶液的浓度为横坐标、质谱中各生物碱峰面积与利血平峰面积的比值为纵坐标绘制各生物碱的标准工作曲线，结果参见表1，表1为附子中11种生物碱的标准工作曲线方程及R2值。表1本发明实施例1提供的附子中11种生物碱的标准工作曲线方程及R2值
权利要求
1.一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法，包括以下步骤a)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；b)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，将得到的溶液作为供给侧、Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧在Caco-2细胞模型中进行吸收转运，自接收侧取样，得到待测样品；c)以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对所述待测样品进行分离检测，得到质谱图；d)根据所述质谱图和预先建立的标准工作曲线得到各生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤a)具体包括将附子粉末浸泡于乙醇中，超声提取并浓缩后，得到浸膏；将所述浸膏溶解于乙醇中，抽滤，将得到的滤液真空干燥后得到生物碱提取物。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超声提取的温度为20°C 30°C。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述超声提取的时间为Ih 池。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述Hanks平衡盐缓冲液的pH值为7 8。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤b)具体包括以下步骤bl)将Caco-2细胞接种于培养板上，培养后得到Caco-2细胞模型；b2)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，得到生物碱提取物溶液；b3)向所述Caco-2细胞模型的绒毛面加入所述生物碱提取物溶液作为供给侧，同时向所述Caco-2细胞模型的基底面加入Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧；或者，向所述Caco-2细胞模型的基底面加入所述生物碱提取物溶液作为供给侧，同时向所述Caco-2细胞模型的绒毛面加入Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧；b4)将步骤b3)得到的Caco-2细胞模型置于振荡培养箱中，于培养20min、40min、60min、90min和120min时自接收侧取样，冷冻干燥后得到待测样品；每次取样结束后，补加等量的Hanks平衡盐缓冲液。
7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述振荡培养箱的温度为35°C 40°C。
8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述振荡培养箱的振荡速度为1转/s 3 转/s。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤c)具体包括以下步骤cl)将所述待测样品溶解于甲醇、乙腈和水的混合溶液中，得到待测溶液；c2)向所述待测溶液中加入利血平，然后采用超高效液相色谱仪和质谱仪进行分离检测，得到质谱图。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述步骤d)中的标准工作曲线按照以下方法建立dl)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；d2)以经过Caco-2细胞孵育的Hanks平衡盐缓冲液为溶剂，配制不同浓度的生物碱提取物溶液，以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪分别对所述生物碱提取物溶液进行分离检测，获得质谱图；d3)根据所述生物碱提取物溶液的浓度和所述质谱图建立各生物碱的标准工作曲线。
全文摘要
本发明提供了一种检测附子中二萜类生物碱在Caco-2细胞模型中吸收转运含量的方法，包括以下步骤a)提取附子中的二萜类生物碱，得到生物碱提取物；b)将所述生物碱提取物溶解于Hanks平衡盐缓冲液中，将得到的溶液作为供给侧、Hanks平衡盐缓冲液作为接收侧在Caco-2细胞模型中进行吸收转运，自接收侧取样，得到待测样品；c)以利血平为内标物，采用超高效液相色谱仪和质谱仪对所述待测样品进行分离检测，得到质谱图；d)根据所述质谱图和预先建立的标准工作曲线得到各生物碱在Caco-2细胞模型中的吸收转运含量。超高效液相色谱仪对复杂样品的分离效果较好，而质谱仪则具有较高的灵敏度和精确性，检测结果更为准确。
文档编号G01N30/72GK102590404SQ20111000264
公开日2012年7月18日 申请日期2011年1月7日 优先权日2011年1月7日
发明者刘志强, 刘淑莹, 宋凤瑞, 邢俊鹏, 郑重, 韩天娇 申请人:中国科学院长春应用化学研究所