专利名称：消肿止痛酊中马兜铃酸a的质量控制方法
技术领域：
本发明涉及医药领域，具体涉及消肿止痛酊中马兜铃酸A的质量控制方法。
背景技术：
消肿止痛酊为广西壮族自治区花红药业股份有限公司的独家产品，该品种收载于 “中华人民共和国卫生部药品标准-中药成方制剂第十二册”，专利号为200710196893. 1， 名称为“细辛药材和消肿止痛酊中马兜铃酸A的质量控制方法”公开了ー种消肿止痛酊中马兜铃酸A的检测方法，该方法在检测纳克级的马兜铃酸吋，存在检测精度不足，存在阴性干扰等问题。因此，有必要进行质量控制方法的进ー步研究，寻找出精度更高的马兜铃酸A的质量控制方法，对消肿止痛酊中的马兜铃酸A进行质量控制。

发明内容
本发明提供一种消肿止痛酊的质量控制方法，主要运用高效液相色谱仪进行检測，目的在于控制消肿止痛酊中马兜铃酸A的含量。本发明消肿止痛酊的质量控制方法内容如下1、色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相的组成为用质量百分比为10% 37%盐酸溶液调节pH至7 8的质量-体积百分比为0. 0.5%的碳酸铵溶液-乙腈，其中溶液与乙腈的体积比为70 90 10 30 ；流速0. 8 1. 5ml/min。；检测波长240 ^Onm。 2、对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加甲醇制成每毫升含马兜铃酸A 1 5yg的溶液，即得。3、供试品溶液的制备精密吸取消肿止痛酊30 70ml，置蒸发皿中，水浴蒸至近干，残渣加碳酸钠溶液30 60ml分次加热溶解转移至250ml分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取3 6次，毎次30 60ml，弃去三氯甲烷液，碱水层用质量百分比为10% 37% 盐酸溶液调pH值至2 3，加三氯甲烷振摇提取3 6次，毎次30 60ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 3ml使溶解，加至40 80mg/2 5ml的阴离子交換固相萃取柱， 控制流速为0. 1 lml/min，再加甲醇适量分次洗涤器具，洗液一同加入小柱上，分別用水、 甲醇清洗至清洗液无色，弃去清洗液，再用体积百分比为6 12%的甲酸甲醇3. 5 4. 5ml 洗脱，收集洗脱液至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。4、測定分別精密吸取对照品溶液10 μ 1与供试品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪， 測定，即得。本发明消肿止痛酊的质量控制方法的优选方法如下
1、色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相的组成为用质量百分比为20%盐酸溶液调节pH至7. 5的质量-体积百分比为0.3%的碳酸铵溶液-乙腈，其中溶液与乙腈的体积比为80 20;流速lml/min。；检测波长250nm。2、对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加甲醇制成每毫升含马兜铃酸A Iyg的溶液，即得。3、供试品溶液的制备精密吸取消肿止痛酊50ml，置蒸发皿中，水浴蒸至近干，残渣加质量-体积百分比为的碳酸钠溶液40ml分次加热溶解至250ml分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取4次，毎次40ml，弃去三氯甲烷液，碱水层用质量百分比为20%盐酸溶液调pH值至2 3，加三氯甲烷振摇提取4次，毎次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇 2ml使溶解，加至60mg/3ml的阴离子交換固相萃取柱，控制流速为0. 5ml/min,固相萃取小柱上，再加甲醇适量分次洗涤器具，洗液一同加入小柱上，分別用水、甲醇清洗至清洗液无色，弃去清洗液，再用体积百分比为8%甲酸甲醇4. 5ml洗脱，收集洗脱液至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。4、測定分別精密吸取对照品溶液10 μ 1与供试品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪， 測定，即得。本发明所提供的质量控制方法解决了痕量马兜铃酸A的检测问题，经系统的方法学研究后，证明该质量控制方法灵敏度高、准确可靠，能够很好的满足实际生产产品的质量控制。
具体实施例方式实施例1供试品采用消肿止痛酊，市售产品，广西壮族自治区花红药业股份有限公司生产，批号:20081205消肿止痛酊的检验的具体操作如下1、色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相的组成为用质量百分比为10%盐酸溶液调节pH至7的质量-体积百分比为0.1%的碳酸铵溶液-乙腈，其中溶液与乙腈的体积比为70 30;流速0. 8ml/min。；检测波长240nm。2、对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加甲醇制成每毫升含马兜铃酸A Iyg的溶液，即得。3、供试品溶液的制备精密吸取消肿止痛酊30ml，置蒸发皿中，水浴蒸至近干，残渣加质量-体积百分比为的碳酸钠溶液30ml分次加热溶解转移至250ml分液漏斗中， 加三氯甲烷振摇提取3次，毎次30ml，弃去三氯甲烷液，碱水层用质量百分比为10%盐酸溶液调PH值至2，加三氯甲烷振摇提取3次，毎次30ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇Iml使溶解，加至40mg/2ml的阴离子交換固相萃取柱，控制流速为0. lml/min，再加甲醇适量分次洗涤器具，洗液一同加入小柱上，分別用水、甲醇清洗至清洗液无色，弃去清洗液，再用体积百分比为6%的甲酸甲醇3. 5ml洗脱，收集洗脱液至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。4、測定分別精密吸取对照品溶液10 μ 1与供试品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪， 測定，即得。5、结果本品每Iml含马兜铃酸A 7. 51ng/ml。实施例2供试品采用消肿止痛酊，市售产品，广西壮族自治区花红药业股份有限公司生产，批号:20090201消肿止痛酊的检验的具体操作如下1、色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相的组成为用质量百分比为10%盐酸溶液调节pH至7的体积百分比0. 1% 碳酸铵溶液-乙腈，其中溶液与乙腈的体积比为80 20；流速lml/min。；检测波长250nm。2、对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加甲醇制成每毫升含马兜铃酸A 2yg的溶液，即得。3、供试品溶液的制备精密吸取消肿止痛酊50ml，置蒸发皿中，水浴蒸至近干，残渣加质量-体积百分比为的碳酸钠溶液40ml分次加热溶解至250ml分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取4次，毎次40ml，弃去三氯甲烷液，碱水层用质量百分比为20%盐酸溶液调pH值至2 3，加三氯甲烷振摇提取4次，毎次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇 2ml使溶解，加至60mg/3ml的阴离子交換固相萃取柱，控制流速为0. 5ml/min,固相萃取小柱上，再加甲醇适量分次洗涤器具，洗液一同加入小柱上，分別用水、甲醇清洗至清洗液无色，弃去清洗液，再用体积百分比为8%甲酸甲醇4. 5ml洗脱，收集洗脱液至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。4、測定分別精密吸取对照品溶液10 μ 1与供试品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪， 測定，即得。5、结果本品每Iml含马兜铃酸A 6. 05ng/ml。实施例3供试品采用消肿止痛酊，市售产品，广西壮族自治区花红药业股份有限公司生产，批号:20101101消肿止痛酊的检验的具体操作如下1、色谱条件色谱柱用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱；流动相的组成为用质量百分比为10%盐酸溶液调节pH至7的质量-体积百分比为0.1%的碳酸铵溶液-乙腈，其中溶液与乙腈的体积比为90 10;流速1. 5ml/min。；
检测波长260nm。2、对照品溶液的制备精密称取马兜铃酸A适量，加甲醇制成每毫升含马兜铃酸A 5yg的溶液，即得。3、供试品溶液的制备精密吸取消肿止痛酊70ml，置蒸发皿中，水浴蒸至近干，残渣加质量-体积百分比为的碳酸钠溶液60ml分次加热溶解转移至250ml分液漏斗中， 加三氯甲烷振摇提取6次，毎次60ml，弃去三氯甲烷液，碱水层用质量百分比为30%盐酸溶液调PH值至3，加三氯甲烷振摇提取6次，毎次60ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇 3ml使溶解，加至480mg/5ml的阴离子交換固相萃取柱，控制流速为lml/min，再加甲醇适量分次洗涤器具，洗液一同加入小柱上，分別用水、甲醇清洗至清洗液无色，弃去清洗液，再用体积百分比为12%的甲酸甲醇4. 5ml洗脱，收集洗脱液至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻， 即得。4、測定分別精密吸取对照品溶液10 μ 1与供试品溶液20 μ 1，注入液相色谱仪， 測定，即得。5、结果本品每Iml含马兜铃酸A 14. 27ng/ml。
权利要求
1.一种消肿止痛酊中马兜铃酸A的质量控制方法，其特征在于采用高效液相色谱仪检测马兜铃酸A的含量，色谱条件是用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为用质量百分比为10 % 37 %盐酸溶液调节pH至7 8的质量-体积百分比为0. 1 % 0. 5 %的碳酸铵溶液-乙腈，其中溶液与乙腈的体积比为70 90 10 30，流速为0.8 1.5ml/min， 检测波长为240 260nm。
2.如权利要求1所述的质量控制方法，其特征在于采用高效液相色谱仪检测马兜铃酸A的含量，色谱条件是用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，流动相为用质量百分比为20% 盐酸溶液调节pH至7. 5的质量-体积百分比为0. 3%的碳酸铵溶液-乙腈，其中溶液与乙腈的体积比为80 20，流速为lml/min，检测波长为250nm。
3.如权利要求1或2所述的质量控制方法，其特征在于用高效液相色谱法测定消肿止痛酊中马兜铃酸A的含量时，对照品溶液的浓度为每毫升含马兜铃酸A 1 5μ g的溶液；供试品为每毫升含消肿止痛酊5 15ml的溶液。
4.如权利要求3所述的质量控制方法，其中供试品溶液是经以下步骤制备成的精密吸取消肿止痛酊30 70ml，置蒸发皿中，水浴蒸至近干，残渣加质量-体积百分比为1 %的碳酸钠溶液30 60ml分次加热溶解转移至250ml分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取3 6 次，毎次30 60ml，弃去三氯甲烷液，碱水层用质量百分比为10% 37%盐酸溶液调pH值至2 3，加三氯甲烷振摇提取3 6次，毎次30 60ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇1 3ml使溶解，加至40 80mg/2 5ml的阴离子交換固相萃取柱，控制流速为0. 1 lml/min，再加甲醇适量分次洗涤器具，洗液一同加入小柱上，分別用水、甲醇清洗至清洗液无色，弃去清洗液，再用体积百分比为6 12%的甲酸甲醇3. 5 4. 5ml洗脱，收集洗脱液至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。
5.如权利要求5所述的质量控制方法，其中供试品溶液是经以下步骤制备成的精密吸取消肿止痛酊50ml，置蒸发皿中，水浴蒸至近干，残渣加质量-体积百分比为1 %的碳酸钠溶液40ml分次加热溶解至250ml分液漏斗中，加三氯甲烷振摇提取4次，毎次40ml，弃去三氯甲烷液，碱水层用质量百分比为20%盐酸溶液调pH值至2 3，加三氯甲烷振摇提取 4次，毎次40ml，合并三氯甲烷液，蒸干，残渣加甲醇2ml使溶解，加至60mg/3ml的阴离子交换固相萃取柱，控制流速为0. 5ml/min，再加甲醇适量分次洗涤器具，洗液一同加入小柱上， 分別用水、甲醇清洗至清洗液无色，弃去清洗液，再用体积百分比为8%甲酸甲醇4. 5ml洗脱，收集洗脱液至5ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇勻，即得。
全文摘要
消肿止痛酊的质量控制方法，目的是控制消肿止痛酊中马兜铃酸A的含量，保证消肿止痛酊中马兜铃酸A的含量满足产品的安全性要求。本发明所提供的方法解决了微量马兜铃酸A的检测问题，建立了高灵敏度、准确可靠的马兜铃酸A质量控制方法。从操作上看，本发明提供的方法准确可靠，精确度高，具有很高的实用价值。
文档编号G01N30/36GK102579961SQ20111000092
公开日2012年7月18日 申请日期2011年1月4日 优先权日2011年1月4日
发明者唐秀玲 申请人:广西壮族自治区花红药业股份有限公司