专利名称：一种可用于快速检测小分子化合物的金标微孔试剂盒的制作方法
技术领域：
—种可用于快速检测小分子化合物的金标微孔试剂盒技术领域[0001]本发明属于食品安全检测领域，具体而言，本发明涉及一种检测动物源性食品中 小分子化合物残留量的金标微孔试剂盒。
背景技术：
[0002]随着生活水平的提高，动物源食品中的药物和添加剂残留日益受到人们的重视。 兽药、农药、食品添加剂、霉菌毒素等由于其使用方法不当或不遵守休药期规定等原因，造 成它们在畜产品中的残留，严重威胁到人民的健康和生命安全，如产生过敏反应、破坏胃肠 道菌群平衡和增强细菌耐药性等。对这些危害物进行及时、准确、快捷的检测，是保护人类 健康、维护社会安定的关键之一。[0003]对于小分子化合物常规的检测方法主要分为理化分析方法和免疫分析方法。理化 分析方法有气相色谱、高效液相色谱、薄层色谱、质谱、串联质谱以及各方法之间的联用技 术等，虽然这些方法准确度高，但是存在操作复杂，对检测人员要求高，检测时间长，成本高 等缺点，不适合现场使用，不利于及时发现和监控管理。免疫分析方法包括放射免疫法、酶 联免疫法、荧光免疫法。本发明一种可用于快速检测小分子化合物的金标微孔试剂盒检测 方法简便、灵敏，不需要昂贵的仪器设备和专业的分析人员，特别适合企业进行现场监测， 易于推广。实用新型内容[0004]本实用新型的目的是提供一种灵敏度高、成本低、操作简单、检测时间短的检测小 分子化合物的试剂盒。[0005]本实用新型的特征在于试剂盒包括12个铝箔袋，每个铝箔袋内装I条微孔板、 微孔板有8个反应孔；8个试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收 垫、反应膜和吸水垫等组成，与常规试纸条不同的是，其中的小分子化合物单克隆抗体-胶 体金标记物不是包被在结合物释放垫上，组装入试纸条，而是冻干在微孔中。[0006]将金标抗体冻干在微孔试剂条中，这样做的好处是在检测过程中，能够使金标抗 体与待检样品液充分接触，充分反应，从而减少误差，增加整个体系的反应灵敏度。[0007]沿样品液流动方向，底板I分为三个区域加样区、反应膜设置区和吸水垫设置 区。反应膜2设于反应膜设置区上；样品垫3设置于加样区上；所述吸水垫设置区上设有吸 水垫4 ;所述反应膜上设有T线5和C线6，其上分别包被有小分子化合物-载体蛋白偶联 物构成的检测线印迹和包被抗抗体构成的质控线印迹，T线与C线相互平行且与样品流动 方向垂直，组合排列可为紫红色的条带“ I I ”，所述T线靠近结合物释放垫，所述C线靠近吸 水垫。[0008]试纸条还包括保护膜7，可覆盖于所述试纸条两端的样品垫和吸水垫上，覆盖在吸 水端上的为手柄端，覆盖在样品吸收垫上的为检测端；所述保护膜为防水材质，可用于固定 检测卡的组件，避免样品或试剂与外界环境中的物质发生反应，影响检测结果。[0009]所述样品垫的长度可为18mm，所述反应膜的长度可为20mm，所述吸水垫的长度可 为20mm。所述检测线距离所述样品垫的垂直距离可为6mm ;所述质控线距离所述吸水垫的 垂直距离可为6_。[0010]所述反应膜、所述样品垫、所述结合物释放垫和所述吸水垫可通过双面胶固定于 盒体的底板上，它们与底板之间可设有高分子材料制成的背衬膜，用以阻止粘合剂中的有 机溶剂对包被的蛋白和抗体的破坏。[0011]本实用新型试剂盒中试纸条底板可为PVC底板；所述样品吸收垫可为吸滤纸；所 述吸水垫可为吸水纸；所述反应膜为硝酸纤维素膜；保护膜为PE材质保护膜；试剂盒盒体 为硬纸盒；包装袋为铝箔袋。[0012]本实用新型试剂盒的检测原理为硝酸纤维素膜(NC)含有预先固定于测试区(T) 的包被抗原、控制区(C)的二抗。样品中的被检物在微孔中与胶体金标记的特异性抗体结 合，抑制了抗体和T区包被抗原的结合，使T区不显色，结果为阳性；反之，T区出现一条肉 眼可见的红色条带，结果为阴性。[0013]本实用新型试剂盒具有以下特点[0014]1.灵敏度闻。本检测试剂盒以I父体金标记闻未和力的单克隆抗体为基础制备而 成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结 合，胶体金对单克隆抗体特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，本实用新 型试剂盒具有较高的特异性和灵敏度。[0015]2.操作简便快速。使用试剂盒检测时无需任何其它试剂，只要将待检样品溶液滴 加于冻干有小分子化合物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂条中，混匀，孵育5min，将 试纸条样品吸收垫端向下，插入孵育后的微孔试剂反应，5min后观察结果。[0016]3.显示检测结果形象、直观准确。检测是试纸条以显示红线色“ I I ”及“ I ”印迹作 为阴性和阳性标记，即在硝酸纤维素膜上显示两条红线“ 11 ”印迹表示在被检测样本液中小 分子化合物的含量低于检测限，一条红线“ I ”印迹表示在被检测样本中小分子化合物含量 高于或等于检测限，结果判定形象、直观、准确、简单明了，不容易出现结果误判。[0017]4.成本低，投资少。使用本实用新型试剂盒，不需另配仪器设备及其他试剂，使现 场检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。[0018]5.易于大范围推广应用。试剂盒操作简单，能较好满足不同层次人员的需要，如专 业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、乳业企业等，具有广阔的市场前景和较大的经济、 社会效益。


[0019]图1为本实用新型试纸条结构示意图；[0020]图2为本实用新型试纸条插入微孔中检测样品示意图；[0021]图3为本实用新型试纸条检测结果判定图；具体实施方式
[0022]一、小分子化合物检测试剂盒组装制备[0023]I试纸条[0024]反应膜2、样品吸收垫3、吸水垫4依次按顺序黏贴在所述底板I上，样品吸收垫的末端与反应膜相连，反应膜的末端与吸水垫相连，样品吸收垫的始端与底板的始端对齐， 吸水垫的末端与底板的末端对齐，试纸两端黏贴有保护膜7，检测线5包被有小分子化合物-载体蛋白偶联物，质控线6包被有抗抗体。[0025]底板为PVC底板，样品吸收垫为吸滤纸，反应膜为硝酸纤维素膜，吸水垫为吸水纸，保护膜为PE材质保护膜。[0026]2微孔板[0027]微孔板8板孔中冻干有小分子化合物单克隆抗体-胶体金标记物。[0028]将试纸条和微孔板装入铝箔袋中。[0029]二、试剂盒的使用[0030]将待检样品溶液200 μ I滴加到冻干有小分子化合物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔试剂中，混匀后，孵育5min，将试纸样品吸收垫端向下，插入孵育后的微孔试剂条后， 5min内观察结果。[0031]三、检测结果分析[0032]小分子化合物在样本中的含量高于或等于检测限时，与微孔试剂条中的小分子化合物单克隆抗体-胶体金标记物结合，从而在检测区内因为竞争反应，金标抗体不会与小分子化合物-载体蛋白结合，检测线不出现红色条带，金标抗体与抗抗体结合，质控线呈红色条带；当小分子化合物在样本中的含量低于检测限时，金标抗体结合位点没被封闭，会与小分子化合物-载体蛋白偶联物结合而出现红色条带。[0033]阴性当质控线(C)显示一条红色条带，检测线(T)同时也显示出一条红色条带， 且检测线(T)颜色接近或浅于质控线(C)时，判为阴性。[0034]阳性当质控线(C)显示一条红色条带，而检测线(T)不显色或颜色很浅时，判为阳性。·[0035]无效当质控线(C)不显示出红色条带，则无论检测线(T)显示出红色条带与否， 该试纸条判为无效。[0036]四、检测试剂盒中用到的材料制备方法如下[0037]1、小分子化合物-载体蛋白偶联物的合成与鉴定[0038]小分子化合物，只有免疫反应性，没有免疫原性,不能诱发机体产生免疫应答,必须与大分子载体蛋白偶联后才具有免疫原性。[0039]将载体蛋白、小分子化合物、小分子化合物-载体蛋白偶联物用pH7. 4的PBS配成 O. 5mg/ml的溶液，以O. 01mol/L pH7. 4PBS调零，用紫外分光光度计在波长200_800nm范围内扫描，得到载体蛋白、小分子化合物、小分子化合物-载体蛋白偶联物的吸收曲线。三者出现不同的吸收曲线，表明小分子化合物与载体蛋白偶联成功。[0040]2、将小分子化合物单克隆抗体-胶体金标记物冻干到微孔中[0041]向每个微孔中加入100 μ I小分子化合物单克隆抗体-胶体金标记物，放入冷冻干燥机中，在冷阱温度为-70°C条件下，预冻4h后，再冻干14h，即可取出，得到冻干有小分子化合物单克隆抗体-胶体金标记物的微孔。
权利要求1.一种检测小分子化合物的金标微孔试剂盒，其特征在于试剂盒包括12个铝箔袋、每个铝箔袋内装I条微孔板、微孔板有8个反应孔；8个试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，微孔中冻干有小分子化合物单克隆抗体-胶体金标记物。
2.如权利要求1所述的检测小分子化合物的金标微孔试剂盒，其特征在于所述反应膜上具有包被有小分子化合物-载体蛋白偶联物构成的检测线印迹和包被抗抗体构成的质控线印迹。
3.如权利要求2所述的检测小分子化合物的金标微孔试剂盒，其特征在于所述检测线和质控线平行。
4.如权利要求2或3所述的检测小分子化合物的金标微孔试剂盒，其特征在于所述检测线距离所述样品垫的垂直距离可为6mm，所述质控线距离所述吸水垫的垂直距离可为 6mm ο
5.如权利要求4所述的检测小分子化合物的金标微孔试剂盒，其特征在于，所述试纸条两端贴有保护膜，覆盖在吸水端上的为手柄端，覆盖在样品吸收垫上的为检测端。
6.如权利要求1所述的检测小分子化合物的金标微孔试剂盒，其特征在于所述底板为 PVC底板，样品吸收垫为吸滤纸，反应膜为硝酸纤维素膜，吸水垫为吸水纸，保护膜为PE材质保护膜。
7.如权利要求1所述的检测小分子化合物的金标微孔试剂盒，其特征在于所述试剂盒盒体为硬纸盒。
专利摘要本实用新型提供了一种检测小分子化合物的金标微孔试剂盒，试剂盒包括12个铝箔袋、每个铝箔袋内装1条微孔板、微孔板有8个反应孔；8个试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样品吸收垫、反应膜、吸水垫和保护膜组成，微孔中冻干有小分子化合物单克隆抗体—胶体金标记物，在反应膜具有包被有小分子化合物—载体蛋白偶联物构成的检测线和包被有抗抗体构成质控线。本实用新型试剂盒具有便携性好，灵敏度高，检测时间短等特点，可以在小分子化合物检测中发挥重要作用。
文档编号G01N33/558GK202854149SQ201220405198
公开日2013年4月3日 申请日期2012年8月16日 优先权日2012年8月16日
发明者徐飞, 何丹婷, 苏丽芳, 李向梅 申请人:北京维德维康生物技术有限公司