专利名称：一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法
技术领域：
本发明涉及一种监测方法，特别是涉及一种利用高效液相色谱法监测3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla的分方法。
背景技术：
硫酸依替米星是拥有自主知识产权的国家一类新药，该药是以庆大霉素Cla为起始原料，采用过渡金属络合物催化方法保护庆大霉素Cla中部分氨基，得中间体3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla，经硅烷化羟基保护、缩合、还原、N-乙基化等反应，将中间体转化为I-N-乙基庆大霉素Cla，即依替米星，再用大孔树脂进行层析分离纯化，然后成盐得成品硫酸依替米星。目前所有的文献和专利中在中间体3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla的生产过程中，均未报到3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla的检测方法。由于原料庆大霉素Cla中有五个氨基，在乙酰化反应时，容易产生保护不足或过保护等副产物，使得中间体3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla收率不高，最终导致产品的合成转化率偏低。

发明内容
针对现有技术的不足，本发明提供一种高效、快速的监测方法，能够在线跟踪反应进程，以便最大收率的合成中间体3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla，提高最终产品硫酸依替米星的合成转化率。为实现上述目的，本发明采用如下技术方案实现一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的方法，选用YMC - PackCN色谱柱，以甲醇和氨水为流动相，限定流动速度在0. 8 I. OmL/min范围内，选用STO检测器，分析中间体3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla的含量。所述的YMC - Pack CN色谱柱选用球形硅胶微粒为基质的氰基型色谱柱。所述的YMC-Pack CN色谱柱选用其规格为(150 250mm) X (4. 6mm)，粒径5 y m的YMC - Pack CN色谱柱。所述的甲醇与氨水的体积比为60 90:40 10。所述的流动相中氨水中氨的含量为0. 04 0. 06mol/L。所述的流速，其进样量为IOiiL,柱温为25°C。所述的SH)检测器选用检测波长220nm为STO-M20A检测器。本发明的技术方案中，采用如下的技术参数(I)高聚物色谱柱YMC-Pack CN 色谱柱，(150 250mm) X (4. 6mm)，粒径 5 y m。(2)流动相流动相组份为甲醇与氨水的体积比为60 90:40 10，氨水中氨的含量为 0. 04 0. 06mol/L。(3)流速0. 8 I. OMl/min，进样量10ii L，柱温25°C。
(4)检测器SPD-M20A，检测波长 220nm。本发明的采用如下的实验器材及试剂(I)实验仪器Prominence高效液相色谱仪(岛津公司)，由LC-20AB泵、SPD-M20A、CT0_20A ;工作站(岛津 LCsolution workstation)(2)实验试剂含中间体3，2’，6’_三-N-乙酰基庆大霉素Cla的供试品反应液(企业提供)；3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla纯品(企业提供)，甲醇(美国Merck公司);氨水(国产分析纯)；高效液相去离子水(自制)。·与现有检测方法相比，本发明的有益效果在于I、原生产工艺中没有针对中间体3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla含量的分析方法，是根据反应时间来判断反应结束，不能准确确定乙酰化反应的终点，造成中间体收率的波动较大。2、本发明通过选择合适的色谱柱，调整流动相的比例，建立了对中间体3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla的先进高效的分析方法，改变了原有生产工艺中跟踪反应的粗放式操作，大大减少了五乙酰化副产物的含量。3、本发明首次米用闻效液相色谱法对中间体3, 2’，6’-二-N-乙酰基庆大霉素Cla进行分析。4、本发明操作方便，为企业在硫酸依替米星生产过程的在线检测提供技术支持。
具体实施例方式下面通过具体的实施例，对本发明做详细的描述实施例I色谱条件检测仪器岛津Prominence高效液相色谱仪；色谱柱YMC - PackCN色谱柱，粒径5 ii m，柱规格(150mm X 4. 6mm);检测器SPD-M20A ;检测波长220nm ;流动相氨水和甲醇体积比为10:90,氨水中氨的含量为0. 04mol/L ;流速0. 8mL/min ;进样量IOuL ;进样物质供试品溶液与对照品溶液。结果3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。实施例2色谱条件检测仪器、检测器、检测波长、进样量、流动相、流速、进样物质同实例1，色谱柱YMC-Pack CN色谱柱，粒径5iim，柱规格(250mmX 4. 6mm)，结果3，2’，6’ -三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。实施例3色谱条件检测仪器、检测器、检测波长、进样量、进样物质同实例1，色谱柱YMC - Pack CN色谱柱，粒径5iim，柱规格(250mmX 4. 6mm)，流动相氨水和甲醇体积比为10:90，氨水中氨的含量为0. 04mol/L ;流速:0. 8mL/min ;结果:3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。实施例4色谱条件检测仪器、检测器、检测波长、进样量、进样物质同实例1，色谱柱YMC - Pack CN色谱柱，粒径5iim，柱规格(250mmX 4. 6mm)，流动相氨水和甲醇体积比为30:70，氨水中氨的含量为0. 06mol/L ;流速:0. 8mL/min ;结果3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。实施例5色谱条件检测仪器、检测器 、检测波长、进样量、进样物质同实例1，色谱柱YMC - Pack CN色谱柱，粒径5iim，柱规格(250mmX 4. 6mm)，流动相氨水和甲醇体积比为30:70，氨水中氨的含量为0. 06mol/L ;流速I. OmL/min ;结果3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。实施例6色谱条件检测仪器、检测器、检测波长、进样量、进样物质同实例1，色谱柱YMC - Pack CN色谱柱，粒径5iim，柱规格(250mmX4. 6mm)，流动相氨水和甲醇体积比为30:70，氨水中氨的含量为0. 06mol/L ;流速1. 2mL/min ;结果:3，2，，6，-三-N-乙酰基庆大霉素Cla与相关物质均达到基线分离。
权利要求
1.一种监测3，2’，6’ -三-N-こ酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于选用YMC - Pack CN色谱柱，以甲醇和氨水为流动相，限定流动速度在O. 8 I. OmL/min范围内，选用SH)检测器，分析中间体3，2’，6’ -三-N-こ酰基庆大霉素Cla的含量。
2.根据权利要求I所述的ー种监测3，2’，6’-三-N-こ酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在干所述的YMC-Pack CN色谱柱选用球形硅胶微粒为基质的氰基型色谱柱。
3.根据权利要求I或2中的任一项所述的一种监测3，2’，6’-三-N-こ酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于所述的YMC-Pack CN色谱柱选用其规格为(150 250mm) X (4. 6mm)，粒径 5 μ m 的 YMC - Pack CN 色谱柱。
4.根据权利要求I所述的ー种监测3，2’，6’-三-N-こ酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于甲醇与氨水的体积比为60 90:40 10。
5.根据权利要求I所述的ー种监测3，2’，6’-三-N-こ酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于所述的流动相中氨水中氨的含量为O. 04 O. 06mol/L。
6.根据权利要求I所述的ー种监测3，2’，6’-三-N-こ酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于所述的流速，其进样量为10 μ L，柱温为25°C。
7.根据权利要求I所述的ー种监测3，2’，6’-三-N-こ酰基庆大霉素Cla含量的方法，其特征在于所述的SH)检测器选用检测波长220nm为SH)-M20A检测器。
全文摘要
本发明涉及一种监测3，2’，6’-三-N-乙酰基庆大霉素Cla及其相关物质的分析方法。本发明采用高效液相色谱法，色谱条件为YMC–Pack CN色谱柱，粒径5μm,柱规格(150～250mm)×(4.6mm)；流动相组分为的氨水和甲醇体积比为40～10:60～90，氨水中氨的含量为0.04～0.06mol/L；流速0.8～1.0mL/min；进样量10μL；检测器SPD-M20A，检测波长220nm；本发明采用简单方便的分析方法就可跟踪反应进程。
文档编号G01N30/36GK102735780SQ201210216280
公开日2012年10月17日 申请日期2012年6月27日 优先权日2012年6月27日
发明者周长清, 姜艳, 封成军, 李兴刚, 谢立成 申请人:常州大学, 常州方圆制药有限公司