专利名称：大建中汤的生物测定方法及使用该方法的质量管理方法
技术领域：
本发明涉及大建中汤的生物测定方法，更详细而言，涉及可使用培养的产生血清素的细胞来定量地评价作为汉方制剂的大建中汤的药理活性值(血清素释放活性)的生物测定方法及使用该方法的大建中汤的质量管理方法。
背景技术：
汉方药是将生药共混而成的药物，其活性成分并非完全确定。另外，其不是利用单一的活性成分而发挥效果是利用多个成分来复合作用，因此，为了保证其品质，需要能够以该制剂整体的形式进行评价的测定方法。实际上，美国FDA的植物药指南对汉方药等产品要求利用生物测定等的质量管理。该质量管理方法有:测定所有认为与药效有关的成分，对它们进行综合评价的方法；以及使用生物材料评价生理活性的生物测定。前者的情况下，在测定的成本、测定方法的确立方面存在问题。另一方面，生物测定有体内(in vivo)试验和体外(in vitro)试验，体内试验的体系在试验设备、试验动物、处理能力等方面存在各种限制，用于汉方药的质量评价伴有困难。另一方面，体外试验体系不需要特殊的设备，可在短时间内得到稳定的试验结果，因此，期望利用该体系确立生物测定法。但是，对于将自身包含多个有効成分的生药组合而成的汉方药，往往未发现适当的生物测定体系，尚待其确立。一直以来，作为用于对汉方药大建中汤的药理效果进行质量管理的生物测定方法，已经构建出直接测定由给与大建中汤引起的肠道平滑肌收缩的方法(马格努斯法(Magnus method))(非专利文献1)。但是，该马格努斯法由于使用从大鼠摘取的肠道，因此，作为以质量评价的常规试验的形式而实施的生物测定方法，使用性差，并且灵敏度、重现性等也不充分。现有技术文献专利文献非专利文献1:日本医科大学医学会杂志(日医大医会誌)，第6卷(3)，第127-129页(2010)，管隼人和内田英二

发明内容
发明要解决的问题因此，本发明的课题是，提供利用简便的体外试验对大建中汤进行生物测定的方法，进而提供利用该方法的大建中汤的准确性更高的质量管理方法。用于解决问题的方案本发明人等着眼于对大建中汤的肠道运动亢进作用、肠道血流增加作用、这些作用与血清素的关系的报道(非专利文献I)，对大建中汤与血清素的关系进行了深入地研究。然后，其结果发现，大建中汤对产生血清素的细胞具有促进血清素释放的作用，通过测定释放的血清素的量，能够测定大建中汤的药理活性值，并且，通过利用该生物测定体系，能够适当进行大建中汤的质量管理，进而完成了本发明。S卩，本发明为一种大建中汤的药理活性的生物测定方法，其特征在于，在培养的产生血清素的细胞中添加含有大建中汤的受试试样，接着，测定培养上清中的血清素含量。另外，本发明为一种大建中汤制剂的质量管理方法，其特征在于，通过上述大建中汤的药理活性的生物测定方法，在相同条件下对作为大建中汤其临床上的药理效果已得到认可的参比制剂与受试制剂评价药理活性，评价参比制剂与受试制剂的等效性。发明的效果根据本发明的生物测定方法，能够不受试验设备、试验动物、处理能力等的限制地、利用简单的体外试验来测定大建中汤的药理活性值(血清素释放活性)，并且，通过在对于评价质量而言为适当的浓度范围内进行本试验，能够对大建中汤进行准确性高的质量管理。


图1是示出大建中汤浓度与血清素(5-HT)释放量的关系的附图。图2是示出利用HPLC的培养试样溶液中的血清素的测定结果的附图。图中的(a)示出未添加大建中汤时的血清素(5-HT)的释放，图中的(b)示出添加900ii g/ml的大建中汤时的血清素(5-HT)的释放。
具体实施例方式大建中汤通常是在将表I的组成的混合生药的提取物粉末化而成的物质(有时称为无麦芽糖大建中汤)中配混提取物的8倍量左右的粉末麦芽糖(麦芽糖英文名:maltose)而成的。[表I]
权利要求
1.一种大建中汤的药理活性的生物测定方法，其特征在于，在培养的产生血清素的细胞中添加含有大建中汤的受试试样，接着，测定培养上清中的血清素含量。
2.根据权利要求1所述的大建中汤的药理活性的生物测定方法，其中，产生血清素的细胞为肠嗜铬样细胞。
3.根据权利要求1或2所述的大建中汤的药理活性的生物测定方法，其中，产生血清素的细胞为选自RIN-14B细胞、QGP-1细胞和KRJ-1细胞中的细胞株。
4.一种大建中汤制剂的质量管理方法，其特征在于，通过权利要求1 3中的任一项所述的大建中汤的药理活性的生物测定方法，在相同条件下对作为大建中汤其临床上的药理效果已得到认可的参比制剂与受试制剂评价药理活性，评价参比制剂与受试制剂的等效性。
5.根据权利要求4所述的大建中汤制剂的质量管理方法，其中，在大建中汤的浓度为90 900 u g/mL的范围内 进行生物测定方法。
全文摘要
本发明的目的在于，提供一种利用简便的体外试验对大建中汤进行生物测定的方法，进而提供利用该方法的大建中汤的准确性更高的质量管理方法。一种大建中汤的药理活性的生物测定方法，其特征在于，该方法在培养的产生血清素的细胞中添加含有大建中汤的受试试样，接着，测定培养上清中的血清素含量，以及一种大建中汤制剂的质量管理方法，其通过该生物测定方法在相同条件下对作为大建中汤其临床上的药理效果已得到认可的参比制剂与受试制剂评价药理活性，评价参比制剂与受试制剂的等效性。
文档编号G01N33/50GK103237899SQ20118005764
公开日2013年8月7日 申请日期2011年11月28日 优先权日2010年12月3日
发明者金子笃, 大野渚 申请人:株式会社津村