专利名称：戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，属于生物技术领域。
背景技术：
戊型肝炎过去称为肠道传播的非甲非乙型肝炎。戊型肝炎病毒(HEV)主要侵犯肝 脏，在肝细胞中复制，本病毒通过对肝细胞的直接损伤和免疫病理作用，引起肝细胞的炎症 或坏死，临床上表现为急性病毒性肝炎。戊型肝炎病毒主要经粪一口途径传播。人感染戊 型肝炎病毒后，可表现为临床型和亚临床型感染。该两类病人均可随粪便排出戊型肝炎病 毒，从而污染水源、食物和周围环境而发生传播。戊型肝炎病毒的检测可作为切断戊型肝炎 传播途径为主的综合性预防措施，防止疾病在人群中传播。 目前戊型肝炎病毒检测方法主要有免疫电子显微镜，免疫荧光法，酶联免疫吸附 试剂，蛋白吸印试验，逆转录聚合酶链反应法(RT-PCR)。 HEV感染的实验室诊断方法主要有血清学检查及分子生物学技术，常用的方法有 补体结合试验和酶联免疫法等，补体结合试验参与反应的成分多，影响因素复杂，操作步骤 复杂并且要求十分严格，容易出现错误；酶联免疫法操作繁琐、重复性差、所需时间长、价格 昂贵，需专门人员操作实验，在一定程度上限制了其应用。

发明内容
本发明要解决的问题是针对现有技术的不足，提供一种适用于临床辅助诊断和鉴 别的戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒及其制备方法，该试剂盒具有结构简单、使用便捷、检测 速度快的优点。 为解决以上问题，本发明的技术方案如下戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒，其特征 在于所述试剂盒包括 检测盒，包括检测盒盒体和盒盖，盒盖的内侧设有硝酸纤维素膜，与硝酸纤维素膜 位置对应的盒盖上设有反应孔，检测盒盒体内设有吸水垫，硝酸纤维素膜上设有有检测点 和质控点； 金标工作液瓶，盛有金标工作液，该金标工作液由金标浓縮液与稀释液混合而成； 和 洗涤液瓶，盛有洗涤液，该洗涤液包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白 和盐酸； 其中，检测点包被有HEV抗原，质控点包被有羊抗鼠抗体。
作为上述技术方案的进一步改进 所述金标浓縮液与稀释液的混合体积比为1 : 15-30。
所述金标浓縮液与稀释液的混合体积比为1 : 20。
所述制备方法包括检测盒、金标工作液和洗涤液的制备；
4
其中，金标工作液的制备包括以下步骤
a、制备金标浓縮液 取1_4%的氯金酸水溶液lOOml，加热至沸腾，加入O. 5_1%柠檬酸三钠溶液 0. 8ml，迅速混匀，待溶液颜色由淡黄一蓝色一紫色一完全透明的酒红色，继续煮沸10分 钟，停止加热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100 y 1，得到混合溶液；
然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓縮液，备用；
b、制备稀释液 将121. 1-363. 3mg的三羟甲基氨基甲烷、0. l-lmg的氯化钠和O. 5-2. Omg的牛血清 白蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后 用盐酸将其pH调节至7. 4，得到稀释液，在2 『C下保存，备用； c、将稀释液与金标浓縮液按比例混合，得到金标工作液，并放置在金标工作液瓶 内。 所述洗涤液的制备包括以下步骤 将121. 1-242. 2mg的三羟甲基氨基甲烷、0. l-lmg的氯化钠和O. l-lmg的牛血清白 蛋白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐 酸将其PH调节为7. 4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2 『C下保存。
所述检测盒的制备包括以下步骤 首先在硝酸纤维素膜的检测点包被HEV抗原，在质控点包被羊抗鼠抗体； 然后将盒盖、硝酸纤维素膜、吸水垫和检测盒盒体按照从上而下的顺序组装并扣
紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40 %的环境下干燥2小时；
最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋内并封口 。 步骤b中，三羟甲基氨基甲烷的用量为242. 2mg，氯化钠的用量为0. 9mg，牛血清白 蛋白的用量为lmg。 所述三羟甲基氨基甲烷的用量为121. lmg，氯化钠的用量为0.9mg，牛血清白蛋白 的用量为0. 5mg。 本发明采用以上技术方案，与现有技术相比，具有以下优点由检测盒、金标工作 液瓶和洗涤液瓶组成，结构简单，只需将待测血清滴入检测盒的硝酸纤维素膜上，就能快速 诊断戊型肝炎病毒特异性抗体，使用简单便捷、检测速度快，临床检验不需任何仪器，避免 了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻了操作人员的劳动强度。
下面结合附图和实施例对本发明作进一步说明


附图1为本发明实施例中试剂盒的结构示意图；
附图2为本发明实施例中检测盒的结构示意图；
附图3为附图2中A-A向的剖视图。
图中， 1-金标工作液瓶，2-洗涤液瓶，3-盒盖，4-硝酸纤维素膜，5-吸水垫，6_检测盒盒
5体，7-检测点，8-质控点，9-反应孔，10-铝箔袋。 具体实施例 实施例l，如图1所示，戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒，包括检测盒、金标工作液瓶 1以及洗涤液瓶2，检测盒放置在铝箔袋10内。 如图2、图3所示，检测盒包括检测盒盒体6和盒盖3，盒盖3的内侧设有硝酸纤维 素膜4，与硝酸纤维素膜4位置对应的盒盖3上设有反应孔9，检测盒盒体6内设有吸水垫 5，硝酸纤维素膜4上设有检测点7和质控点8，检测点7包被有HEV抗原，质控点8包被有 羊抗鼠抗体。 金标工作液瓶l内盛有金标工作液，该金标工作液是由金标浓縮液经稀释液稀释 所获得的。 洗涤液瓶2内盛有洗涤液，该洗涤液是由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋
白和盐酸配制获得的。 该试剂盒通过以下步骤制备( — )检测盒的制备 首先在硝酸纤维素膜的检测点7包被HEV抗原，在质控点8包被羊抗鼠抗体；
然后将盒盖3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和检测盒盒体6按照从上而下的顺序组 装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40 %的环境下干燥2小时；
最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋10内并封口 ；
( 二 )金标工作液的制备
a、制备金标浓縮液 取1%的氯金酸水溶液lOOml，加热至沸腾，加入O. 5X柠檬酸三钠溶液0.8ml，迅 速混匀，待溶液颜色由淡黄一蓝色一紫色一完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加 热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100 y 1，得到混合溶液；
然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓縮液，备用；
b、制备稀释液 将121. lmg的三羟甲基氨基甲烷、0. lmg的氯化钠和0. 5mg的牛血清白蛋白置于 容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其 pH调节至7. 4，得到稀释液，在2 『C下保存，备用； c、将稀释液与金标浓縮液按15 : 1的体积比混合，得到金标工作液，并放置在金
标工作液瓶1内；(三)制备洗涤液 将121. lmg的三羟甲基氨基甲烷、0. lmg的氯化钠和O. lmg的牛血清白蛋白置于容 量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH 调节为7. 4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2 『C下保存；(四)在金标工作液瓶1和洗涤液瓶2上贴好标签后与检测盒一起组装成试剂盒。
以上试剂盒的使用、检测方法
6
1、样本收集 将静脉血置于干净、未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收縮，离心取血清检测。
2、检测 a、取出试剂盒，室温平衡20 30分钟； b、滴加洗涤液1滴于硝酸纤维膜4上，待液体将硝酸纤维膜4完全湿润； c、加待测150 ii 1血清于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入； d、滴加3滴金标工作液于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入； e、滴加3滴洗涤液于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。 3、结果判断 阳性若被测标本中含有戊型肝炎病毒抗体，标本中的HEV特异性抗体便与硝酸 纤维素膜4上的固相HEV抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加 上金标鼠抗人单克隆抗体，滤过时金标记单抗便与复合物结合，即可在检测点7观察到红 色反应标记。同时，金标鼠抗人单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点 8形成红色反应标记，检测点7有红色反应标记出现，这表明被测标本中含有戊型肝炎病毒 抗体，为阳性结果。 阴性若被测标本中不含有戊型肝炎病毒抗体，反应体系中的金标鼠抗人单克隆
抗体与包被的HEV抗原无法形成间接抗原_抗体反应，即在检测点7无红色反应标记，同
时，金标单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记，
检测点7无红色反应标记出现，这表明被测标本中不含有戊型肝炎病毒抗体，为阴性结果。 无效反应后，若质控点不显色，表明操作失误或试剂失效。 使用本发明实施例的试剂盒对1000例测试标本进行检测，结果如下表
标本^\测试标本(例)测试结果(例)符合率(％)
阳性11310895.6
阴性88788099.2 从以上检测方法及检测结果可以看出，本发明的试剂盒只需将待测血清滴入检测 盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断戊型肝炎病毒特异性抗体，使用简单便捷、检测速度 快，符合率高，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻 了操作人员的劳动强度。 实施例2，如图1所示，戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒，包括检测盒、金标工作液瓶 1以及洗涤液瓶2，检测盒放置在铝箔袋10内。 如图2、图3所示，检测盒包括检测盒盒体6和盒盖3，盒盖3的内侧设有硝酸纤维 素膜4，与硝酸纤维素膜4位置对应的盒盖3上设有反应孔9，检测盒盒体6内设有吸水垫 5，硝酸纤维素膜4上设有检测点7和质控点8，检测点7包被有HEV抗原，质控点8包被有 羊抗鼠抗体。 金标工作液瓶l内盛有金标工作液，该金标工作液是由金标浓縮液经稀释液稀释所获得的。 洗涤液瓶2内盛有洗涤液，该洗涤液是由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋
白和盐酸配制获得的。
该试剂盒通过以下步骤制备( — )检测盒的制备 首先在硝酸纤维素膜的检测点7包被HEV抗原，在质控点8包被羊抗鼠抗体；
然后将盒盖3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和检测盒盒体6按照从上而下的顺序组 装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40 %的环境下干燥2小时；
最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋10内并封口 ； [OOSS] ( 二 )金标工作液的制备
a、制备金标浓縮液 取2%的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0. 7%柠檬酸三钠溶液0. 8ml，迅 速混匀，待溶液颜色由淡黄一蓝色一紫色一完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加 热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100 y 1，得到混合溶液；
然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓縮液，备用；
b、制备稀释液 将363. 3mg的三羟甲基氨基甲烷、0. 5mg的氯化钠和1. 5mg的牛血清白蛋白置于 容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其 pH调节至7. 4，得到稀释液，在2 『C下保存，备用； c、将稀释液与金标浓縮液按20 : 1的体积比混合，得到金标工作液，并放置在金
标工作液瓶1内；(三)制备洗涤液 将242. 2mg的三羟甲基氨基甲烷、0. 5mg的氯化钠和0. 7mg的牛血清白蛋白置于容 量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH 调节为7. 4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2 『C下保存；(四)在金标工作液瓶1和洗涤液瓶2上贴好标签后与检测盒一起组装成试剂盒。
以上试剂盒的使用、检测方法
1、样本收集 将静脉血置于干净、未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收縮，离心取血清检测。
2、检领lj a、取出试剂盒，室温平衡20 30分钟； b、滴加洗涤液1滴于硝酸纤维膜4上，待液体将硝酸纤维膜4完全湿润； c、加待测150 ii 1血清于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入； d、滴加3滴金标工作液于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入； e、滴加3滴洗涤液于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。 3、结果判断 阳性若被测标本中含有戊型肝炎病毒抗体，标本中的HEV特异性抗体便与硝酸
8他无关物质则被滤过，再加 上金标鼠抗人单克隆抗体，滤过时金标记单抗便与复合物结合，即可在检测点7观察到红 色反应标记。同时，金标鼠抗人单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点 8形成红色反应标记，检测点7有红色反应标记出现，这表明被测标本中含有戊型肝炎病毒 抗体，为阳性结果。 阴性若被测标本中不含有戊型肝炎病毒抗体，反应体系中的金标鼠抗人单克隆
抗体与包被的HEV抗原无法形成间接抗原_抗体反应，即在检测点7无红色反应标记，同
时，金标单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记，
检测点7无红色反应标记出现，这表明被测标本中不含有戊型肝炎病毒抗体，为阴性结果。 无效反应后，若质控点不显色，表明操作失误或试剂失效。 使用本发明实施例的试剂盒对1000例测试标本进行检测，结果如下表
\^果 标本^\测试标本(例)测试结果(例)符合率(％)
阳性11310996.5
阴性88787098. 1 从以上检测方法及检测结果可以看出，本发明的试剂盒只需将待测血清滴入检测 盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断戊型肝炎病毒特异性抗体，使用简单便捷、检测速度 快，符合率高，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻 了操作人员的劳动强度。 实施例3，如图1所示，戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒，包括检测盒、金标工作液瓶 1以及洗涤液瓶2，检测盒放置在铝箔袋10内。 如图2、图3所示，检测盒包括检测盒盒体6和盒盖3，盒盖3的内侧设有硝酸纤维 素膜4，与硝酸纤维素膜4位置对应的盒盖3上设有反应孔9，检测盒盒体6内设有吸水垫 5，硝酸纤维素膜4上设有检测点7和质控点8，检测点7包被有HEV抗原，质控点8包被有 羊抗鼠抗体。 金标工作液瓶1内盛有金标工作液，该金标工作液是由金标浓縮液经稀释液稀释 所获得的。 洗涤液瓶2内盛有洗涤液，该洗涤液是由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋
白和盐酸配制获得的。
该试剂盒通过以下步骤制备( — )检测盒的制备 首先在硝酸纤维素膜的检测点7包被HEV抗原，在质控点8包被羊抗鼠抗体；
然后将盒盖3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和检测盒盒体6按照从上而下的顺序组 装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40%的环境下干燥2小时；
最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋10内并封口 ；
(二)金标工作液的制备
a、制备金标浓縮液 取3%的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入0. 8%柠檬酸三钠溶液0. 8ml，迅 速混匀，待溶液颜色由淡黄一蓝色一紫色一完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加 热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100 y 1，得到混合溶液；
然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓縮液，备用；
b、制备稀释液 将242. 2mg的三羟甲基氨基甲烷、0. 9mg的氯化钠和1. Omg的牛血清白蛋白置于 容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其 pH调节至7. 4，得到稀释液，在2 『C下保存，备用； c、将稀释液与金标浓縮液按25 : 1的体积比混合，得到金标工作液，并放置在金
标工作液瓶1内；(三)制备洗涤液 将121. lmg的三羟甲基氨基甲烷、0.9mg的氯化钠和0.5mg的牛血清白蛋白置于容 量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH 调节为7. 4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2 『C下保存；(四)在金标工作液瓶1和洗涤液瓶2上贴好标签后与检测盒一起组装成试剂盒。
以上试剂盒的使用、检测方法
1、样本收集 将静脉血置于干净、未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收縮，离心取血清检测。
2、检领[J a、取出试剂盒，室温平衡20 30分钟； b、滴加洗涤液1滴于硝酸纤维膜4上，待液体将硝酸纤维膜4完全湿润； c、加待测150 ii 1血清于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入； d、滴加3滴金标工作液于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入； e、滴加3滴洗涤液于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。 3、结果判断 阳性若被测标本中含有戊型肝炎病毒抗体，标本中的HEV特异性抗体便与硝酸 纤维素膜4上的固相HEV抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加 上金标鼠抗人单克隆抗体，滤过时金标记单抗便与复合物结合，即可在检测点7观察到红 色反应标记。同时，金标鼠抗人单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点 8形成红色反应标记，检测点7有红色反应标记出现，这表明被测标本中含有戊型肝炎病毒 抗体，为阳性结果。 阴性若被测标本中不含有戊型肝炎病毒抗体，反应体系中的金标鼠抗人单克隆 抗体与包被的HEV抗原无法形成间接抗原_抗体反应，即在检测点7无红色反应标记，同 时，金标单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记， 检测点7无红色反应标记出现，这表明被测标本中不含有戊型肝炎病毒抗体，为阴性结果。
无效反应后，若质控点不显色，表明操作失误或试剂失效。
10
使用本发明实施例的试剂盒对1000例测试标本进行检测，结果如下表
\^果 标本^\测试标本(例)测试结果(例)符合率(％)
阳性11311198. 2
阴性88788599.8 从以上检测方法及检测结果可以看出，本发明的试剂盒只需将待测血清滴入检测 盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断戊型肝炎病毒特异性抗体，使用简单便捷、检测速度 快，符合率高，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻 了操作人员的劳动强度。 实施例4，如图1所示，戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒，包括检测盒、金标工作液瓶 1以及洗涤液瓶2，检测盒放置在铝箔袋10内。 如图2、图3所示，检测盒包括检测盒盒体6和盒盖3，盒盖3的内侧设有硝酸纤维 素膜4，与硝酸纤维素膜4位置对应的盒盖3上设有反应孔9，检测盒盒体6内设有吸水垫 5，硝酸纤维素膜4上设有检测点7和质控点8，检测点7包被有HEV抗原，质控点8包被有 羊抗鼠抗体。 金标工作液瓶l内盛有金标工作液，该金标工作液是由金标浓縮液经稀释液稀释 所获得的。 洗涤液瓶2内盛有洗涤液，该洗涤液是由三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋
白和盐酸配制获得的。 该试剂盒通过以下步骤制备( — )检测盒的制备 首先在硝酸纤维素膜的检测点7包被HEV抗原，在质控点8包被羊抗鼠抗体；
然后将盒盖3、硝酸纤维素膜4、吸水垫5和检测盒盒体6按照从上而下的顺序组 装并扣紧，组装成检测盒； 将检测盒放置在湿度小于40%的环境下干燥2小时；
最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋10内并封口 ；
(二)金标工作液的制备
a、制备金标浓縮液 取4%的氯金酸水溶液100ml，加热至沸腾，加入1. 0%柠檬酸三钠溶液0. 8ml，迅 速混匀，待溶液颜色由淡黄一蓝色一紫色一完全透明的酒红色，继续煮沸10分钟，停止加 热，冷却至室温； 向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100 y 1，得到混合溶液；
然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓縮液，备用；
b、制备稀释液 将242. 2mg的三羟甲基氨基甲烷、lmg的氯化钠和2mg的牛血清白蛋白置于容量瓶 内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐酸将其pH调节至7. 4，得到稀释液，在2 『C下保存，备用； c、将稀释液与金标浓縮液按30 : 1的体积比混合，得到金标工作液，并放置在金
标工作液瓶1内；(三)制备洗涤液 将121. lmg的三羟甲基氨基甲烷、lmg的氯化钠和lmg的牛血清白蛋白置于容量瓶 内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将其pH调节 为7. 4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶内，置于2 『C下保存；(四)在金标工作液瓶1和洗涤液瓶2上贴好标签后与检测盒一起组装成试剂盒。
以上试剂盒的使用、检测方法
1、样本收集 将静脉血置于干净、未加抗凝剂的容器内，静置使血自然收縮，离心取血清检测。
2、检测 a、取出试剂盒，室温平衡20 30分钟； b、滴加洗涤液1滴于硝酸纤维膜4上，待液体将硝酸纤维膜4完全湿润； c、加待测150 ii 1血清于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入； d、滴加3滴金标工作液于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入； e、滴加3滴洗涤液于硝酸纤维膜4上，待液体充分吸入后于3分钟内观察结果。 3、结果判断 阳性若被测标本中含有戊型肝炎病毒抗体，标本中的HEV特异性抗体便与硝酸 纤维素膜4上的固相HEV抗原发生特异性结合形成复合物，而其他无关物质则被滤过，再加 上金标鼠抗人单克隆抗体，滤过时金标记单抗便与复合物结合，即可在检测点7观察到红 色反应标记。同时，金标鼠抗人单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点 8形成红色反应标记，检测点7有红色反应标记出现，这表明被测标本中含有戊型肝炎病毒 抗体，为阳性结果。 阴性若被测标本中不含有戊型肝炎病毒抗体，反应体系中的金标鼠抗人单克隆
抗体与包被的HEV抗原无法形成间接抗原_抗体反应，即在检测点7无红色反应标记，同
时，金标单克隆抗体与质控点8上包被的羊抗鼠抗体结合，在质控点8形成红色反应标记，
检测点7无红色反应标记出现，这表明被测标本中不含有戊型肝炎病毒抗体，为阴性结果。 无效反应后，若质控点不显色，表明操作失误或试剂失效。 使用本发明实施例的试剂盒对1000例测试标本进行检测，结果如下表
标本测试表本(例)测试结果(例)符合率(％)
阳性11311097.3
阴性88788699,9 从以上检测方法及检测结果可以看出，本发明的试剂盒只需将待测血清滴入检测 盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断戊型肝炎病毒特异性抗体，使用简单便捷、检测速度
12快，符合率高，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻 了操作人员的劳动强度。
权利要求
戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒，其特征在于所述试剂盒包括检测盒，包括检测盒盒体(6)和盒盖(3)，盒盖(3)的内侧设有硝酸纤维素膜(4)，与硝酸纤维素膜(4)位置对应的盒盖(3)上设有反应孔(9)，检测盒盒体(6)内设有吸水垫(5)，硝酸纤维素膜(4)上设有有检测点(7)和质控点(8)；金标工作液瓶(1)，盛有金标工作液，该金标工作液由金标浓缩液与稀释液混合而成；和洗涤液瓶(2)，盛有洗涤液，该洗涤液包括三羟甲基氨基甲烷、氯化钠、牛血清白蛋白和盐酸；其中，检测点(7)包被有HEV抗原，质控点(8)包被有羊抗鼠抗体。
2. 如权利要求1所述的戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒其特征在于所述金标浓縮液与 稀释液的混合体积比为l : 15-30。
3. 如权利要求2所述的戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒其特征在于所述金标浓縮液与 稀释液的混合体积比为1 : 20。
4. 戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述制备方法包括检测 盒、金标工作液和洗涤液的制备；其中，金标工作液的制备包括以下步骤a、 制备金标浓縮液取1_4%的氯金酸水溶液lOOml，加热至沸腾，加入O. 5-1%柠檬酸三钠溶液0. 8ml，迅 速混匀，待溶液颜色由淡黄一蓝色一紫色一完全透明的酒红色，继续煮沸IO分钟，停止加 热，冷却至室温；向得到的溶液中加入lmg/ml的抗人IgG单克隆抗体溶液100iU，得到混合溶液； 然后将混合溶液进行离心处理，弃去上清液，得到下层金标浓縮液，备用；b、 制备稀释液将121. 1-363. 3mg的三羟甲基氨基甲烷、0. l-lmg的氯化钠和O. 5_2. Omg的牛血清白蛋 白置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，最后用盐 酸将其pH调节至7. 4，得到稀释液，在2 『C下保存，备用；c、 将稀释液与金标浓縮液按比例混合，得到金标工作液，并放置在金标工作液瓶(1)内。
5. 如权利要求4所述的戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述 洗涤液的制备包括以下步骤将121. 1-242. 2mg的三羟甲基氨基甲烷、0. l-lmg的氯化钠和O. l-lmg的牛血清白蛋白 置于容量瓶内，加入双蒸水，轻摇使之完全溶解，然后继续加入双蒸水至100mL，再用盐酸将 其pH调节为7.4，得到洗涤液，放在洗涤液瓶(2)内，置于2 『C下保存。
6. 如权利要求4所述的戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所述 检测盒的制备包括以下步骤首先在硝酸纤维素膜的检测点(7)包被HEV抗原，在质控点(8)包被羊抗鼠抗体； 然后将盒盖(3)、硝酸纤维素膜(4)、吸水垫(5)和检测盒盒体(6)按照从上而下的顺 序组装并扣紧，组装成检测盒；将检测盒放置在湿度小于40%的环境下干燥2小时；最后将干燥后的检测盒放置在铝箔袋内并封口 。
7. 如权利要求4所述的戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于步骤b中，三羟甲基氨基甲烷的用量为242. 2mg，氯化钠的用量为0. 9mg，牛血清白蛋白的用量为 lmg。
8. 如权利要求5所述的戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒的制备方法，其特征在于所 述三羟甲基氨基甲烷的用量为121. lmg，氯化钠的用量为O. 9mg，牛血清白蛋白的用量为 0. 5mg。
全文摘要
本发明涉及一种戊型肝炎病毒抗体检测试剂盒，包括检测盒、盛有金标工作液的金标工作液瓶和盛有洗涤液的洗涤液瓶，检测盒包括检测盒盒体和盒盖，盒盖的内侧设有硝酸纤维素膜，与硝酸纤维素膜位置对应的盒盖上设有反应孔，检测盒盒体内设有吸水垫，硝酸纤维素膜上设有有检测点和质控点，检测点包被有HEV抗原，质控点包被有羊抗鼠抗体，只需将待测血清滴入检测盒的硝酸纤维素膜上，就能快速诊断戊型肝炎病毒特异性抗体，使用简单便捷、检测速度快，临床检验不需任何仪器，避免了实验过程中各种因素对结果的影响以及减轻了操作人员的劳动强度。
文档编号G01N33/576GK101738475SQ201010011330
公开日2010年6月16日 申请日期2010年1月11日 优先权日2010年1月11日
发明者孙明强, 杨致亭, 王好玉, 范永熙, 陶德友 申请人:杨致亭