专利名称：中药余甘子全时段三波长融合同时测定三种成分含量的方法
技术领域：
本发明属于采用现代分析检测手段和信息处理手段对中药材的质量进行检测的技术领域，涉及ー种中药材多指标成分的含量控制方法，更具体的说是ー种中药余甘子全时段三波长融合同时测定三种成分含量的方法。
背景技术：
据中华人民共和国药典2010年版一部记载本品为大戟科植物余甘子Phyllanthus emblica L.的干燥成熟果实,冬季至春果实成熟时采收,除去杂质,干燥。余甘子始载于《南方草木状》。余甘子味甘、寒、无毒，用于清热肿毒，利咽润肺，化痰止咳，生津止渴。余甘子主治血病、赤巴病、培根病，肝病，心脏病和高血压病，以治疗血热血瘀引起的血病为长。近年研究表明余甘子具有抗氧化，抗癌，抗病毒，降血脂等作用。余甘子主产于 云南，四川,广东,广西。余甘子主要含有鞣质类、黄酮类、多糖和维生素C，鞣质类主要为没食子酸、诃子酸、诃黎勒酸、诃子裂酸、鞣花酸、表儿茶素等；黄酮类主要为槲皮素、山奈酚、芦丁等；多糖为D-葡萄糖、D-果糖、蔗糖等。随着科学技术的发展，现代先进分析检测仪器的普遍使用以及信息处理技术的逐步完善，使中药分析检测水平有了显著提高，中药质量控制方法得到不断改进。近年来通过建立HPLC图谱对中药材指标成分进行含量測定成为中药质量控制和评价的ー种发展趋势。中药HPLC图谱是指某些中药材或中成药经过适当处理后，利用现代信息采集技术和质量分析手段得到的能够显现中药材或中成药化学特征的光谱图或色谱图。由于在三个不同色谱条件下使用不同的前处理方法对余甘子中没食子酸、表儿茶素和鞣花酸分别进行检测是无法实现对余甘子药材进行全面和整体评价的，因此，遵循信息最大化原则建立全时段三波长融合同时测定中药余甘子三种指标成分含量可以获取一种较为有效的质量控制方法，从而保证余甘子药材质量的安全、稳定和可靠。余甘子药材在中药材中占有十分重要的地位。目前，市售的余甘子药材质量參差不齐，因此余甘子药材的稳定性难以保证。2010版中国药典规定的含量測定本品按干燥品计算，含没食子酸(C7H6O5)不得少于I. 2%。

发明内容
本发明目的在于采用现代分析检测手段和信息处理手段建立余甘子药材全时段三波长融合HPLC图谱技术，及其中三个指标成分的含量測定方法，以确保余甘子药材的质量控制方法更加简便、合理、可靠。本发明是通过以下技术方案实现的中药余甘子全时段三波长融合同时测定三种成分含量的方法，其特征在于包括下步骤(I)供试品溶液的制备取余甘子药材(过16目筛)约3_5g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入70%こ醇33mL，加热回流1_2小时，提取三次，回收合并滤液，加水定容至20ml，使溶液终浓度为O. 15g/ml，精密吸取续滤液17mL，加在聚酰胺树脂柱上，用蒸馏水90mL洗涤，再用105mL 50%こ醇洗脱，收集こ醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至IOmL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(2)对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品、表儿茶素对照品、鞣花酸对照品和槲皮素对照品适量，加甲醇分别制成每ImL含没食子酸对照品O. 44mg、表儿茶素对照品O. 1495mg和鞣花酸对照品O. 03775mg,即得；(3)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂的AgilentTC-C18 (4. 6mmX 250 mm, 5 μ m)色谱柱；以O. 2%磷酸水为流动相A，以こ腈为流动相B，进行梯度洗脱；流速I. OmL/min ;柱温35°C ；DAD检测器在波长230nm、254nm和280nm下同时进行检测；进样量5 μ L ;理论塔板数计算，应不低于3000 ；
(4)全时段三波长融合采用多波长融合HPLC图谱技术将230nm、254nm和280nm三个波长下的谱图数据进行全时段融合，得到ー张能够同时包含三个波长信息的色图谱。(5)样品含量測定应用融合后的HPLC图谱数据，计算样品中三种指标成分的含量。(6)对上述确定的含量測定方法进行有效性评价，其中包括专属性、准确度、精密度、重复性、稳定性、线性范围以及耐用性。本发明所述的中药余甘子全时段三波长融合同时测定三种成分含量的方法与现有的中国药典规定的測定方法相比所具有的积极效果在于(I)本发明首次公开通过建立余甘子药材全时段三波长融合HPLC图谱并对其指标成分进行含量測定的方法，此方法对同一样品不同成分多波长同时定量分析，从而完善了余甘子药材质量控制方法。(2)本发明采用现代先进分析检测技术，对余甘子药材三个指标成分进行分析检測，从而获得极其丰富的信息量。(3)本发明通过信息处理手段将余甘子药材三波长下的色谱图进行全时段融合，在保证数据信息损失最小的前提下，获得ー张同时反应三个波长信息的色谱图。(4)本发明的三种指标成分含量控制方法，其优点是操作简单，稳定可靠，精密度、重复性、回收率均达到定量分析要求，能够综合宏观地分析余甘子药材的质量。(5)本发明通过建立余甘子药材全时段三波长融合HPLC图谱，对余甘子药材中的ニ类成分进行定性和定量分析，较全面真实地掲示余甘子药材的内在质量特征，从而保证了余甘子药材的安全、有效、可靠、稳定，确保了其质量的均衡稳定和エ艺的规范化。


图I是230nm波长下对照品没食子酸、表儿茶素和鞣花酸的HPLC色谱图。图2是254nm波长下对照品没食子酸、表儿茶素和鞣花酸的HPLC色谱图。图3是280nm波长下对照品没食子酸、表儿茶素和鞣花酸的HPLC色谱图。图4是没食子酸的紫外扫描图。图5是表儿茶素的紫外扫描图。图6是鞣花酸的紫外扫描图。
图7是余甘子药材230nm波长下HPLC色谱图。图8是余甘子药材254nm波长下HPLC色谱图。图9是余甘子药材280nm波长下HPLC色谱图。图10是余甘子药材全时段多波长融合的色谱图。
具体实施例方式中药余甘子全时段三波长融合同时测定三种成分含量的方法，包括下述步骤I、供试品溶液的制备取余甘子药材(过16目筛)3g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入70%こ醇33mL，加热回流1.5小时，提取三次，回收合并滤液，加水定容至20ml，使溶液终浓度为 O. 15g/ml，精密吸取续滤液17mL，加在聚酰胺树脂柱上，用蒸馏水90mL洗涤，再用105mL50%こ醇洗脱，收集こ醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至IOmL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；2、色谱条件与适应性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂的AgilentTC-C18 (4. 6mmX 250 mm, 5 μ m)色谱柱；以O. 2%磷酸水为流动相A，以こ腈为流动相B，进行梯度洗脱，流速I. OmL/min ;柱温35°C ；DAD检测器在波长230nm、254nm和280nm下同时进行检测；进样量5μ L ;理论塔板数计算，应不低于3000 ；表I流动相梯度洗脱表
时间(min)流动相A (%)流动相B (%)
O973
9973
11928
408614
607525
706040本发明所述的余甘子药材3种成分含量控制方法，由分析检测仪器得到230nm、254nm、280nm三个波长下的谱图数据，运用信息处理手段全时段融合三个波长下的谱图数据，得到ー张能够同时包含三个波长信息的色图谱。本发明所述的余甘子药材3种成分含量控制方法,将230nm、254nm、280nm三个波长下的谱图数据全时段融合后可获得ー组谱图数据。其中指纹图谱数据见表2表2融合峰图谱数据
jj序I保留时间I峰高 I峰面积
1:10. 554 309. 1344 7051. 687
2:36.494 137.2737 3011.118
3J54. 50067 1117. 2189〔1999.186 '
本发明所述的余甘子药材质量控制方法，得到的HPLC图谱数据，可以用于余甘子 药材指标成分的定量分析。
权利要求
1.中药余甘子全时段三波长融合同时测定三种成分含量的方法，其特征在于包括下述步骤(1)供试品溶液的制备取余甘子药材(过16目筛)约3g，精密称定，置圆底烧瓶中，精密加入70%乙醇33mL，加热回流I. 5小时，提取三次，回收合并滤液，加水定容至20ml，使溶液终浓度为O. 15g/ml，精密吸取续滤液17mL，加在聚酰胺树脂柱上，用蒸馏水90mL洗涤，再用105mL 50%乙醇洗脱，收集乙醇洗脱液，蒸干，残渣加甲醇使溶解并转移至IOmL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得；(2)对照品溶液的制备精密称取没食子酸对照品、表儿茶素对照品和鞣花酸对照品适量，加甲醇分别制成每ImL含没食子酸对照品O. 44mg、表儿茶素对照品O. 1495mg和鞣花酸对照品O. 03775mg,即得；(3)色谱条件与系统适用性试验用十八烷基键合硅胶为填充剂的AgilentTC-C18色谱柱；色谱柱规格为4. 6mmX 250 mm, 5 μ m ;以O. 2%磷酸水为流动相A，以乙腈为流动相B，按表I中的规定进行梯度洗脱；流速I. OmL/min ;柱温35°C;DAD检测器在波长230nm、254nm和280nm下同时进行检测；进样量5μ L ;理论塔板数计算，应不低于3000 ； 流动相梯度洗脱技术参数为
全文摘要
本发明公开了全时段三波长融合同时测定中药余甘子三种成分含量的方法，它是将现代分析检测手段和信息处理手段结合起来，有效融合中药材指标成分的谱图信息，所测成分均为最大紫外吸收波长，增大检测成分的信噪比，可以克服单一波长单一指标检测时信息量不足的缺点，从而较完善地反映中药材的内在质量。本发明的三种成分质量控制方法操作简单、稳定可靠、重现性较好，可用于中药材质量评价和控制及中药新药研发中。特别是可将其作为余甘子药材质量控制及真伪鉴别的指标之一。
文档编号G01N30/02GK102818862SQ201210159078
公开日2012年12月12日 申请日期2012年5月22日 优先权日2012年5月22日
发明者孟宪生, 张云坤, 王飞, 包永睿, 王帅 申请人:辽宁中医药大学