专利名称：一种检测精浆γ-L-谷氨酰转肽酶试剂盒及检测方法
技术领域：
本发明涉及一种生物化学试剂盒及检测方法，具体说是一种检测精浆Y -L-谷氨 酰转肽酶试剂盒及检测方法。
背景技术：
精浆富含γ -L-谷氨酰转肽酶(Y -GT)，γ -GT是谷光苷肽(GSH)代谢的关键酶， 在保护精子免受氧自由基损害方面起了重要作用。精液中的Y-GT主要来自前列腺，其活 性的检测可用于评价前列腺的功能。精浆中的Y-GT可分解Y-谷氨酰-α-萘酚为游离 的α-萘酚，α-萘酚与重氮试剂作用产生红色，其色泽深浅与酶活性成正比。目前，开展精浆Y -GT活性检测项目的男科实验室极少，我们在前期建立手工检 测精浆Y-GT方法的基础上，又进一步建立了半自动生化分析仪检测法。手工检测方法的 具体操作过程中，精浆样本需用生理盐水进行1 200稀释后方可检测，稀释后精浆样本与 基质液在37°C温育15min后，再加入重氮试剂，混勻后37°C再次温育5min，然后用分光光 度计比色，手工计算获得结果，每次检测所需α萘胺标准液10 μ 1，基质液0. 5ml，重氮试剂 5ml。该法操作步骤较多，费时、费试剂，且精浆在检测前需稀释，很难在临床常规检测中广 泛使用。

发明内容
发明目的本发明的目的是为了提供一种能使检测精浆Y-GT时操作简便、省时、 节省试剂、结果稳定可靠、能广泛适用于临床检测的检测精浆Y -GT试剂盒及检测方法。技术方案为了解决上述技术问题，本发明所述的一种检测精浆Y-GT试剂盒，包 括α萘胺标准液、Y-谷氨酰-α-萘胺基质液和重氮试剂；其中所述α萘胺标准液，浓度 为2. 86mg/ml ； γ -谷氨酰-α -萘胺基质液，浓度为2. 71mg/ml ；重氮试剂由lg/L亚硝酸钠 水溶液与2g/L氨基苯磺酸溶液以1 4体积比混勻配制而成，每IOOml所述氨基苯磺酸溶 液中含有20ml醋酸。按每个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述α萘胺标准液为 0. Iml 士 4 μ 1、γ -谷氨酰-α -萘胺基质液为30ml ± 1.2ml,重氮试剂为200ml 士 8ml。一种用检测精浆、-GT试剂盒检测精浆、-GT的方法，该方法包括如下步骤1)依据反应原理和仪器性能设定检测参数；2)在空白管中加入基质液，在标准管中加入标准液和基质液，在样品管中加入精 浆和基质液；3)将步骤2)中的空白管、标准管和样品管同时进行温育，温育时间为15min、温育 温度为37°C ；4)再向步骤3)中温育好的空白管、标准管和样品管中加入重氮试剂，混勻后37°C 再次温育5min，通过检测仪器进行比色，得出结果。所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为项目类型为终点法；主波长为5IOnm ；延迟时间为3s ；测量时间为3s ；项目单位为U/ml ；标准浓度为80U/ml ；比色皿温度 为 37°C。步骤2)中所述的精浆是将液化精液通过3000g离心15min获得的上清液。有益效果与我们前期建立的手工法相比，使用本发明中的试剂盒以及用该试剂 盒进行检测的方法，能使操作简便、省时，无需进行样品稀释，无需计算仪器直接给出结果； 基质液用量为原来的3/5，重氮试剂用量为原来的2/5，从而节省试剂用量；采用本发明，能 够作同步对比试验，使得结果稳定可靠，能广泛适用于各级医院的男科实验室。


附图为光密度与Y-GT活性的线性关系图。
具体实施例方式下面结合实施例对发明作进一步的详细说明，应理解这些实施例仅用于说明本发 明而不用于限制本发明的范围。实施例1 本发明一种检测精浆Y-GT试剂盒，包括α萘胺标准液、谷氨 酰-α-萘胺基质液和重氮试剂。其中所述α萘胺标准液，浓度为2.86mg/ml;Y-谷氨 酰-α-萘胺基质液，浓度为2.71mg/ml ；重氮试剂由lg/L亚硝酸钠水溶液与2g/L氨基苯 磺酸溶液以1 4体积比混勻即可，其中每IOOml氨基苯磺酸溶液中含有20ml醋酸。按每 个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述α萘胺标准液为0. Iml士4μ 1、γ-谷氨 酰-α -萘胺基质液为30ml 士 1. 2ml，重氮试剂为200ml 士 8ml。实施例2 —种用实施例1中的一种检测精浆、-GT试剂盒进行检测精浆、-GT的 方法，该方法的具体步骤如下1)设定检测仪器参数所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为项目类 型为终点法；主波长为510nm ；延迟时间为3s ；测量时间为3s ；项目单位为U/ml ；标准浓度 为80U/ml ；比色皿温度为370C ；2)在空白管中加入基质液，在标准管中加入标准液和基质液，在样品管中加入精 浆和基质液；3)将上述空白管、标准管和样品管同时进行温育，温育时间为15min、温育温度为 370C ；所述的精浆是将液化精液通过3000g离心15min获得的上清液；4)向温育好的空白管、标准管和样品管中加入重氮试剂，混勻后37°C再次温育 5min，通过检测仪器进行比色，得出结果。实施例3 按照实施例2的检测方法对适合反应体系的反应体积进行确定依据手工法检测结果，选择Y-GT活性在正常参考值范围上限附近的精浆样本1 例。分别取100、200、300、400μ 1基质液，每管用生理盐水补足至总体积为400 μ 1，分别加 入1 μ 1精浆样本，混勻后37°c温育15min，加5ml重氮试剂，37°C再次温育5min，510nm检 测各管吸光度。根据基质应过量，能保证反应充分进行的原则，发现300 μ 1基质液与1 μ 1 精浆反应较为合适。在此基础上，取4支试管，分别加300 μ 1基质液和1 μ 1精浆样本，混 勻后37°C温育15min，分别加l、2、3、4ml重氮试剂，37°C再次温育5min，然后前三管依次加 入3、2、lml生理盐水，以保证总体积一致，混勻后510nm检测各管吸光度。选择能保证充分
4反应的最小量作为重氮试剂量，故反应体系中重氮试剂用量选择为2ml。实施例4 在实施例2和实施例3的基础上进行批内和批间变异检测依据手工法检测结果，选择Y -GT活性在正常参考值范围为94. 90U/ml 260. 32U/ml上限和下限附近的精浆样本各1例，均分成2份，每份500 μ 1，1份在同一批 次内用半自动生化分析仪按照实施例2的方法并按照表一中的检测步骤和反应条件重复 检测10次，计算批内变异系数(CV)，得CV< 15% ；另1份置于-20°C冻存，检测方法如实 施例2，检测步骤和反应条件如表一，每天检测1次，共10次，计算批间变异系数(CV)，得 CV < 15%，结论批内和批间的变异检测得到的CV接近，表示使用该试剂盒方法检测精浆 Y-GT活性稳定、可靠。表一反应条件
权利要求
一种检测精浆γ L 谷氨酰转肽酶试剂盒，其特征在于，包括α萘胺标准液、γ 谷氨酰 α 萘胺基质液和重氮试剂；其中所述α萘胺标准液的浓度为2.86mg/ml；γ 谷氨酰 α 萘胺基质液的浓度为2.71mg/ml；重氮试剂由1g/L亚硝酸钠水溶液与2g/L氨基苯磺酸溶液以1∶4体积比混匀配制而成，每100ml所述氨基苯磺酸溶液中含有20ml醋酸。
2.根据权利要求1所述的一种检测精浆Y-L-谷氨酰转肽酶试剂盒，其特征在于，按每 个试剂盒装载100个测试所需检测试剂计算，所述α萘胺标准液为0. Iml 士 4μ 1、γ-谷氨 酰-α -萘胺基质液为30ml 士 1. 2ml，重氮试剂为200ml 士 8ml。
3.用权利要求1或2所述的一种检测精浆Y-L-谷氨酰转肽酶试剂盒检测精浆Y-L-谷氨酰转肽酶的方法，其特征在于，该方法包括如下步骤1)依据反应原理和仪器性能设定检测参数；2)在空白管中加入基质液，在标准管中加入标准液和基质液，在样品管中加入精浆和 基质液；3)将步骤2)中的空白管、标准管和样品管同时进行温育，温育时间为15min、温育温度 为 37°C ；4)再向步骤3)中温育好的空白管、标准管和样品管中加入重氮试剂，混勻后37°C再次 温育5min，通过检测仪器进行比色，得出结果。
4.根据权利要求3所述的一种用检测精浆Y-L-谷氨酰转肽酶试剂盒检测精浆Y-L-谷氨酰转肽酶的方法，其特征在于，所述检测仪器为半自动生化分析仪，它的参数为 项目类型为终点法；主波长为510nm ；延迟时间为3s ；测量时间为3s ；项目单位为U/ml ；标 准浓度为80U/ml ；比色皿温度为37°C。
5.根据权利要求3所述的一种用检测精浆Y-L-谷氨酰转肽酶试剂盒检测精浆Y-L-谷氨酰转肽酶的方法，其特征在于，步骤2)中所述的精浆是将液化精液通过3000g离 心15min获得的上清液。
全文摘要
本发明公开了一种检测精浆γ-L-谷氨酰转肽酶试剂盒及检测方法，该检测精浆γ-GT试剂盒，包括α萘胺标准液、γ-谷氨酰-α-萘胺基质液和重氮试剂。该检测方法为首先设定检测仪器参数；在空白管中加入基质液，在标准管中加入标准液和基质液，在样品管中加入精浆和基质液；将上述空白管、标准管和样品管同时进行温育，温育时间为15min、温育温度为37℃；加入重氮试剂，混匀后37℃再次温育5min，通过检测仪器进行比色，得出结果。本发明中的试剂盒及检测方法能使操作简便、省时、节省试剂；采用本发明，能够作同步对比试验，使得结果稳定可靠，适用于各级医院的男科实验室。
文档编号G01N21/31GK101974614SQ201010501709
公开日2011年2月16日 申请日期2010年9月29日 优先权日2010年9月29日
发明者卢坤刚, 陆金春, 陈晓慧 申请人:南京欣迪生物药业工程有限责任公司