专利名称：特异性结合分析方法和其所采用的装置的制作方法
技术领域：
本发明涉及进行试样中的分析对象的定性或定量分析的特异性结合分析方法。
背景技术：
近年，伴随家庭内和地域医疗的充实，紧急性较高的临床检查等的增加，人们突然希望即使不是临床检查的专家，仍可快速，简便并且正确地实施测定的特异性结合分析方法的开发。
作为特异性结合分析方法，人们知道有应用抗原抗体反应的免疫测定法(immunoassay)，采用受体的受体测定法(receptor assay)，采用互补的核酸序列的杂交法的核酸检验测试(prove assay)等的多种方法，由于其特异性较高，这些特异性结合分析方法广泛地用于以临床检查为首的较广的领域。
更具体地说，例举作为免疫测定法的1种的色谱分析法。在该色谱分析法中，比如，使液态试样与基质(matrix)接触，该基质由比如，特异性结合物质未溶化的多孔性载体，或微小颗粒填充型单体形成，液态试样沿基质，在毛细管现象产生的渗透力的作用下流出，利用该现象，对试样中的分析对象的是否存在进行分析(JP特许第2504923号和第2667793号的相应说明书，以及JP特公平7-78503号，JP特开平10-73592号和JP特开平8-240591号的相应文献)。
具体来说，使通过借助肉眼或光学的方法等可任意检测的标识材料标识的特异性结合物质与分析对象发生特异性结合反应。另外，使与分析对象发生特异性结合反应的特异性结合物质，与固定于基质上的结合材料结合，对应于固定于基质上的标识量，最终，对试样中的分析对象存在与否进行分析。
在上述色谱分析法中，由于基质的载体表面积较大，故可不溶化大量的特异性结合物质，由于可能引起特异性结合反应的反应分子之间的冲突频率大于液相中的反应的情形，故从测定灵敏度和测定时间的方面来说是有利的。
在上述过去的色谱分析法中，基质必须采用可借助毛细管现象，展开输送液体试样的吸水性材料。该吸水性材料采用比如，玻璃纤维滤纸，纤维素膜，硝化纤维素膜，尼龙膜等。这些材料采用多孔性的，具有孔径在1～50μm的范围内的孔的类型。
特别是，由于硝化纤维素具有即使在不预先进行增敏处理的情况下，仍具有与大量的抗体那样的蛋白质结合的能力，故该材料是优良的。另外，由于获得具有各种孔径的硝化纤维素，故如果采用它，则还可选择试样的流速。
上述那样的基质材料由纤维状材料形成，但是，难于以良好的再现性控制孔径和表面的亲水性，进行生产。该孔径的平均值和分布状况，以及纤维状表面的亲水性对试样的展开输送速度，即，流速造成大大影响。由于特异性结合反应发生的时间大大依赖该流速，故测定值也伴随流速的变化而改变。即，由于测定值对基质材料的特性，非常敏感地反应，故测定精度依赖于基质材料的制造精度。
另外，难于使该基质材料的制造精度提高到确保定量测定的足够精度。因此，具有下述问题，即，必须要求基质材料的分选步骤，花费成本。另外，由于孔径的范围、其制造精度受到限制，故试样流速的选择幅度也受到限制。
此外，在申请号为JP特原2001-322447的文献中，描述了对应于上述情况的、可在较宽的范围内容易控制流速的、流速的制造再现性高的特异性结合分析方法和其所采用的特异性结合分析装置。但是，在该申请号为JP特原2001-322447的文献中公开的内容中，未与第2特异性结合物质结合的成分有时残留于检测部，在该残留成分中，有时含有标识材料。因此，有时使检测部的残留标识材料重叠于检测信号中。即，由于残留标识材料的原因，检测信号的背景上升，其结果是，具有测定的S/N降低的情况。
于是，本发明的目的在于提供流速的控制范围较宽，并且流速的制造再现性较高，另外，可避免检测信号的背景的上升的特异性结合分析方法，以及其所采用的特异性结合分析装置。按照本发明，可扩大试样流速的选择幅度，另外，同样在制造水平上，可高精度地再现流速。另外，按照本发明，由于可避免检测信号的背景的上升，可以较低的成本，实现高精度的特异性结合分析装置。
本发明的概述为了解决上述问题，本发明提供下述的特异性结合分析方法，该方法采用下述特异性结合分析装置，该特异性结合分析装置包括试样点染部，该试样点染部点染包括分析对象物的液态的试样；空间形成部，该空间形成部与上述试样点染部连接，呈现毛细管现象；检测部，该检测部可检测在上述空间形成部的内部，因特异性结合反应而产生的信号，上述被点染的试样因毛细管现象的作用，移向空间形成部内的检测部，产生特异性结合反应，采用通过检测该特异性结合反应所形成的信号对上述分析对象进行定性，定量的特异性结合分析装置，较之上述检测部，在上述试样的移动方向的下游侧，其特征在于增加在上述空间形成部呈现的毛细管现象产生的液体输送力。
在上述的特异性结合分析方法中，最好，通过对上述试样通过上述检测部的速度进行控制，控制上述特异性结合反应发生的时间。
另外，最好，通过对上述空间形成部与外部气氛连通的部分的截面积和距离进行控制，控制上述试样通过上述检测部的速度，控制上述特异性结合反应所发生的时间。
此外，最好，通过在上述空间形成部与外部气氛连通的部分，设置第1通气性部件，控制上述试样通过上述检测部的速度，控制上述特异性结合反应所发生的时间。
再有，“空间形成部与外部气氛连通的部分”指在空间形成部中，试样点染部以外的部分，并且相当于在试样通过毛细管现象输送时，所压出的空气可通过的位置的部分。
还有，最好，通过将具有因毛细管现象而呈现的吸水特性的第2通气性部件，设置于较之上述检测部、试样的移动方向的下游侧，增加毛细管现象产生的液体输送力。
此外，上述特异性结合方法包括下述步骤步骤A使与上述分析对象发生特异性结合的、并且由可检测的标识材料标识的第1特异性结合物质，与上述分析对象结合；步骤B使与上述分析对象发生特异性结合，并且可实质上固定于上述检测部的第2特异性结合物质，与上述分析对象结合；步骤C测定在上述检测部产生的，因上述标识材料而获得的信号的强度；步骤D根据在上述步骤C中已测定的信号的强度，对上述试样中的分析对象进行定性，或定量。
另外，最好，在上述试样点染部，点染规定容量的试样后，使在上述步骤B，通过毛细管现象的作用，使未与上述第2特异性结合物质结合的成分，移向上述空间形成部的内部的较之检测部的试样的移动方向的下游侧。
此外，最好，在上述步骤C，通过上述分析对象，将上述第1特异性结合物质与第2特异性结合物质结合。
还有，最好，将上述第1特异性结合物质保持在上述试样点染部与检测部之间的空间形成部与试样的接触面上，使上述试样实现点染，其处于湿润状态，由此，使上述第1特异性结合物质在上述接触面上运动，移向上述检测部。
再有，最好，上述信号带有颜色，为荧光，或发光，最好，上述第1特异性结合物质和第2特异性结合物质中的至少一个为抗体。另外，上述标识材料为含有金属溶胶，染料溶胶，荧光物质的颗粒，或着色胶乳颗粒。
另外，本发明涉及一种特异性结合分析装置，该特异性结合分析装置包括试样点染部，该试样点染部点染包括分析对象物的液态的试样；空间形成部，该空间形成部与上述试样点染部连接，呈现毛细管现象；检测部，该检测部可检测在上述空间形成部的内部，因特异性结合反应而产生的信号，上述被点染的试样因毛细管现象的作用，移向前述空间形成部内的前述检测部，产生特异性结合反应，检测该特异性结合反应所形成的信号，由此，对上述分析对象进行定性、定量，其特征在于其还包括下述机构，该机构在较之上述检测部的、上述试样的移动方向的下游侧，增加在上述空间形成部呈现的毛细管现象产生的液体输送力。
最好，上述特异性结合分析装置包括第1通气性部件，该第1通气性部件设置于上述空间形成部与外部气氛连通的部分。
最好，上述机构为第2通气性部件，该第2通气性部件具有因毛细管现象而呈现的吸水特性，并且设置于较之上述检测部的、试样的移动方向的下游侧。
最好，在上述特异性结合分析装置中，将上述第1特异性结合物质保持在试样点染部与检测部之间的上述空间形成部与上述试样的接触面上，使上述试样实现点染，其处于湿润状态，由此，可使上述第1特异性结合物质在上述移动面上运动，使其朝向上述检测部移动。
最好，上述空间形成部由二块平板、与规定上述平板的间距的间隔件构成，上述检测部设置于上述平板上，通过上述平板，检测上述特异反应所产生的信号。
附图的简要描述

图1为表示本发明的一个实施例的特异性结合分析装置的组成的示意剖视图；图2为从图1所示的Z方向观看的特异性结合分析装置的示意图；图3为表示本发明的另一实施例的特异性结合分析装置的组成的示意剖视图；图4为从图3所示的Z方向观看的特异性结合分析装置的示意图；图5为表示本发明的还一实施例的特异性结合分析装置的组成的分解透视图；图6为图5所示的特异性结合分析装置的组合透视图；本发明的具体描述本发明涉及下述特异性结合分析方法，该方法采用下述特异性结合分析装置，该特异性结合分析装置包括试样点染部，该试样点染部点染包括分析对象物的液态的试样；空间形成部，该空间形成部与上述试样点染部连接，呈现毛细管现象；检测部，该检测部可检测在上述空间形成部的内部，因特异性结合反应而产生的信号，上述被点染的试样因毛细管现象的作用，移向上述空间形成部内的上述检测部，产生特异性结合反应，检测该特异性结合反应所形成的信号，由此，对上述分析对象物进行定性，定量；较之上述检测部的，在上述试样的移动方向的下游侧，其特征在于增加在上述空间形成部呈现的毛细管现象产生的液体输送力。
在这里，液体输送力指通过毛细管现象，输送液体的能力。“液体输送力大”指空间形成部与液体接触的面的亲水性高、并且液体的保持量大。因此，如果在较之上述检测部的、试样的移动方向的下游侧，增加在上述空间形成部所呈现的毛细管现象的液体输送力，在液体到达上述检测部时，则将全部液体输送到下游侧。但是，点染的试样的量必须小于等于下游侧液体的保持量。
本发明还涉及一种特异性结合分析方法中所用的特异性结合分析装置，该特异性结合分析装置包括试样点染部，该试样点染部点染包括分析对象物的液态的试样；空间形成部，该空间形成部与上述试样点染部连接，呈现毛细管现象；检测部，该检测部可检测在上述空间形成部的内部，因特异性结合反应而产生的信号，上述已点染的试样因毛细管现象的作用，移向空间形成部内的检测部，产生特异性结合反应，检测该特异性结合反应所形成的信号，由此，对上述分析对象进行定性，定量，其特征在于其还包括下述机构，该机构在较之上述检测部的，上述试样的移动方向的下游侧，增加在上述空间形成部呈现的毛细管现象产生的液体输送力。
下面参照附图，对本发明的实施例进行具体描述。
图1为表示本发明的一个实施例的特异性结合分析装置的组成的示意剖视图。另外，图2为从图1所示的Z方向观看的特异性结合分析装置的示意图。
该装置由比如，第1毛细管1和第2毛细管2构成，该第1毛细管1构成比如，内径(d1)为5mm，长度(L)为30mm的空间形成部，该第1毛细管1由玻璃制成，该第2毛细管2发挥做为内径(d2)为0.5mm，长度(L2)为3mm，外径为5mm的通气阻力控制机构的作用，由玻璃制成。
象图1所示的那样，第2毛细管2插入到第1毛细管1中。在这里，第2毛细管2的外侧面与第1毛细管1的内侧面紧密贴合，实质上，空气无法透过它们之间。第2毛细管2与第1毛细管1通过比如，粘接剂而紧密贴合的方式接合。
在第1毛细管1的内部，设置有检测部3，该检测部3，由作为连接材料的第2特异性结合物质固定于第1毛细管1的内壁上而形成。另外，该检测部3位于距第1毛细管1的开口部4(未插入第2毛细管2的一侧)的距离(Z1)约2mm的部分，Z方向的检测部3的长度约为1mm。另外，Z1表示从开口部4的端部，到检测部3的中心的距离。
此外，在第1毛细管1的内部，插入有吸水性部件5，该吸水性部件5是按照直径为5mm，长度(L2)为20mm的尺寸对玻璃纤维滤纸GA200(东洋株式会社生产)进行加工而获得的通气性部件。该吸水性部件5的一端位于与第1毛细管1的内部的开口部4的距离(Z2)约3mm的部分，与检测部3相接。在本实施例中，开口部4实现作为试样点染部的作用。
图1所示的特异性结合分析装置按照使开口部4向下，并且上述装置的长度方向与水平方向实质上垂直的方式设置，使开口部4与试样的表面接触。如果这样，则试样的液面因毛细管现象而向Z方向移动。即，试样的液面上升。此时，试样的液面移动(上升)，直至试样的表面张力的垂直方向分量，与作用于已上升的试样的柱上的重力保持平衡。
从图1所示的特异性结合分析装置中，去除第2毛细管2和吸水性部件5，在通常的大气压和室温的气氛下，试样采用尿等的水溶液，在此场合，试样的液面的移动(上升)距离Z约为6mm。此时，液面在约2～3秒的期间，移动6mm，然后静止。
但是，从图1所示的装置中，仅仅去除吸水性部件5，在通常的大气压和室温的气氛下，试样采用尿等的水溶液，在此场合，试样的液面的移动(上升)距离Z约为6mm。此时，液面在约30秒的期间，移动6mm，然后静止。其原因如下。
伴随因毛细管现象的作用，试样向上的移动，由于空气被试样压，故空气也移动。在这里，如果将第1毛细管1的开口部4的相反侧完全封闭，由于将空气压缩，则压力上升。另外，由于该被压缩的空气的压力与大气压之间的差，即，上升的压力部分进一步与重力作用，故试样上升不到6mm，而保持静止。但是，如果未完全将第1毛细管1的开口部4的相反侧封闭，由于伴随试样的移动而压缩的空气慢慢地排出，故最终处于与大气压的平衡的状态，试样上升6mm，然后静止。
但是，到静止时的时间与下述场合相比较而增加，该场合指使第1毛细管1的开口部4的相反侧完全敞开的场合(没有第2毛细管2的状态)。换言之，试样的移动速度降低。该移动速度的降低程度依赖于第1毛细管1的开口部4的相反侧的通气阻力。由于该通气阻力因第2毛细管2的有无而变化，故移动速度也因第2毛细管2的有无而变化。具体来说，没有第2毛细管2的场合，与具有的场合相比较，通气阻力下降，移动速度增加。
根据这些情况可知道，通过对第1毛细管1的开口部4的相反侧的通气阻力进行控制，可控制试样的移动速度。在这里，第2毛细管2的内径(d2)越小，换言之，内部空间(空间形成部)的截面积越小，通气阻力越大，第2毛细管2的长度越长，通气阻力越大。比如，在第2毛细管2的内径(d2)为1.0mm，长度(L)为3mm的场合，在7～10秒的期间，上升6mm，然后停止。另外，在第2毛细管2的内径(d2)为0.5mm，长度(L)为2mm的场合，在20～25秒的期间，上升6mm，然后停止。
上述的移动速度为没有吸水性部件5的场合的移动速度。如果插入吸水性部件5，由于显然，通气阻力增加，故无论第2毛细管2的有无，或即使第2毛细管2的内径和长度与上述为相同的条件，移动速度仍比上述速度小。但是，在采用图1所示的那样的配置的场合，由于该吸水性部件5的一端位于与第1毛细管1内的开口部4的距离(Z2)约3mm的部分，故试样的液面在上升6mm之前，到达吸水性部件5的一端。且，试样被吸水性部件5吸收。
下面对在试样点染部所点染的试样的容量进行描述。在试样的容量大于等于液面上升6mm所必需的容量的场合，由于液面到达吸水性部件5的一端，为后者所吸收。在这里，必须将全部的，未与位于检测部3上的第2特异性结合物质结合的成分吸收于吸水性部件5中，从而其不残留于检测部3中。因此，在试样点染部所点染的试样的容量必须小于等于可吸收于吸水性部件5中的试样的最大容量。
具体来说，上述结构的吸水性部件5可吸收的试样的最大容量约大于等于0.2ml。另外，使试样的液面上升6mm所必需的试样的容量约为0.12ml。因此，如果试样的容量在0.12～0.2ml的范围内，则可将全部的，未与位于检测部3上的第2特异性结合物质结合的试样中的成分吸收于吸水性部件5中，使该成分不残留于检测部3中。一般来说，上述吸水性部件5的一端(底端)设置于伴随毛细管现象而移动的试样的液面可到达的位置，同时，所点染的试样的容量为可到达吸水性部件5的底端的容量以上，并且小于等于吸水性部件5可吸收的最大容量即可。
象上述那样，可通过对第1毛细管1的开口部4的相对侧的通气阻力进行控制，可控制试样通过检测部3的速度，控制特异性结合反应发生的时间。于是，也可可控制反映特异性结合反应的反应的信号强度，可自由地设定分析的灵敏度，浓度范围。另外，可在较之检测部的，试样的移动方向的下游侧，借助吸水性部件5的存在的作用，使在第1毛细管1内呈毛细管现象的液体输送力增加。由此，未与第2特异性结合物质结合的成分不会残留于检测部，可避免检测信号的背景(background)上升，可防止信号的S/N的降低。另外，上述的数值在下述场合获得，在该场合，按照使开口部4朝下，并且上述装置的长度方向实质上与水平方向相垂直的方式设置。在此以外的设置的场合，上述数值是不同的，但是，如果是从事本领域的技术人员，则可通过试验，适当地进行选择。
此外，还可通过借助吸水性部件5本身的通气阻力，控制开口部4的相反侧的通气阻力，控制移动速度。在这里，在确保必要的吸水能力的基础上，通过控制玻璃纤维滤纸GA200的密度和长度等，可控制通气阻力。即，可通过使吸水性部件5发挥吸水效果与通气阻力控制效果的方式来实现。
下面通过实施例，对本发明进行更具体的描述，但是，本发明不限于这些第1实施例和比较实例1在本实施例中，采用上述图1所示的本发明的特异性结合分析装置，对作为分析对象的，尿中的人体绒毛性性腺刺激激素(hCG)进行分析。
第1特异性结合物质和第2特异性结合物质采用可参与与hCG的夹层(sandwich)反应的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体，标识材料采用胶态金。在这里，在采用胶态金这样的着色粒子的场合，由于着色粒子微小，故可使标识集中于较小的区域，或容积中，可采用下述信号，正确地进行hCG的定性，或定量，该信号指在检测部3中，作为第1特异性结合物质的标识材料的胶态金所促进的反应而造成的信号。另外，通过使去脂奶的分散水溶液通过第1毛细管1，将其内壁保护。
首先，调制尿，与通过胶态金标识的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体的混合溶液，将该混合溶液作为试样。在此状态的试样中，作为分析对象的hCG，与通过胶态金标识的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体结合。在以约0.15ml的容量将该试样点染于作为试样点染部的开口部4处时，试样因毛细管现象而上升，通过检测部3。接着，在经过约1分钟后，从外表方面，全部的液体成分吸收于吸水性部件5中，液体成分不残留于检测部3。
此时，被点染的试样中的分析对象与第2特异性结合物质进行特异性结合。由此，分析对象通过第2特异性结合物，固定于检测部3。即，作为通过胶态金标识的第1特异性结合物质的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体与通过分析对象hCG，固定于检测部3上的作为第2特异性结合物质的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体结合。由此，在检测部3，对应于分析对象hCG的浓度，产生颜色。在这里，由于在检测部3上，未残留未与第2特异性结合物质特异性结合的胶态金成分，故与未存在吸水性部件5的场合相比较，对比度显著增加。
在HCG浓度实质上为零的精度管理用的控制尿中，添加hCG，调制各种浓度的试样。采用这些中的各种试样，根据上述那样的原理，确认检测部3处的胶态金所引起的的显色程度。各试样的hCG浓度分别为0(IU/L)，3(IU/L)，10(IU/L)，30(IU/L)，100(IU/L)，300(IU/L)，1000(IU/L)，3000(IU/L)和10000(IU/L)。其结果是，如果采用具有大于等于10(IU/L)的hCG浓度的试样，则可确认显色。
接着，在省略吸水性部件5的场合，以同样方式进行实验。在此场合，试样因毛细管现象的作用而上升，试样的顶面在约30～35秒的期间，约移动5mm，然后静止。另外，如果采用具有大于等于300(IU/L)的hCG浓度的试样，则可确认显色。
此外，在省略吸水性部件5和第2毛细管的场合，按照同样方式进行实验。在此场合，试样因毛细管现象的作用而上升，试样的顶面在约2～3秒的期间，约移动5mm，然后静止。另外，仅仅在采用具有大于等于10000(IU/L)的hCG浓度的试样的场合，可确认显色。
象上面所描述的那样，如果依据本发明的特异性结合分析装置，则通过对第1毛细管1的开口部4的相反侧的通气阻力进行控制，可控制试样通过检测部3的速度。另外，可在较之检测部的试样的移动方向的下游侧，在吸收性部件5的存在的作用下，使在第1毛细管内部呈现的毛细管现象造成的液体输送力增加。由此，未与第2特异性结合物质结合的成分不残留于检测部，可避免检测信号的背景(background)上升，可防止信号的S/N的降低，由于这些原因，可进行信号强度的控制，可使信号的S/N的提高造成的最小检测浓度提高。
另外，在本实施例中，在点染前将通过胶态金标识的第1特异性结合物质与尿混合，但是，也可在试样点染部的开口部4与检测部3之间，使该第1特异性结合物质在干燥状态保持。由此，可将尿直接，点染于开口部4处，进行分析。在此场合，通过液体试样的尿，干燥状态保持的第1特异性结合物质处于湿润状态，可自由移动，在分析对象与第1特异性结合物质结合的状态，向检测部3移动，可同样实现对应于浓度的显色。
第2实施例接着，采用图3所示的本发明的特异性结合分析装置，对作为分析对象的，尿中的人体绒毛性性腺刺激激素(hCG)进行分析。图3表示示出本发明的再一实施例的特异性结合分析装置的组成的示意剖视图，图4表示从图3所示的Z方向观看到的特异性结合分析装置的示意图。
在图3中，第1毛细管1，检测部3和作为试样点染部的开口部4与图1的相同。但是，第2毛细管2不存在，使吸水性部件5的长度L1变化，控制通气阻力。换言之，还使吸水性部件发挥通气性部件的功能。
在本实施例中，采用与第1实施例相同，按照直径为5mm，长度(L2)为20mm的尺寸，对玻璃纤维滤纸GA200(东洋株式会社生产)进行加工而获得的吸水性部件5，按照直径为5mm，长度25mm的尺寸，对该纸进行加工而获得的吸水性部件5’。
除此以外，采用与第1实施例所使用的特异性结合分析装置相同的构成，由于吸水性部件5’的体积大于吸水性部件5，故其吸收能力和通气阻力均大于吸水性部件5。
首先，同样对于本实施例，通过采用吸水性部件5的图3和图4所示的装置，与第1实施例相同，调制尿与胶态金标识的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体的混合溶液，将该混合溶液作为试样，点染于开口部4处。在按照约0.15ml的容量，将该试样点染于作为试样点染部的开口部4处时，试样因毛细管现象的作用而上升，通过检测部3。另外，在经历约30～40秒后，从示意上说，全部的液体成分为吸水性部件5吸收，液体成分不残留于检测部3上。
另外，与第1实施例相同，在HCG浓度实质上为零的精度管理用的控制尿中，添加hCG，调制各种浓度的试样。确认检测部3中的胶态金的着色程度。各试样的hCG浓度分别为0(IU/L)，3(IU/L)，10(IU/L)，30(IU/L)，100(IU/L)，300(IU/L)，1000(IU/L)，3000(IU/L)和10000(IU/L)。其结果是，在采用具有大于等于30(IU/L)的hCG浓度的试样的场合，可确认着色。
接着，通过采用使长度变化的吸水性部件5’的图3和图4所示的装置，与上述相同，按照约0.15ml的容量，将上述试样点染于作为试样点染部的开口部4处。试样因毛细管现象的作用而上升，通过检测部3。接着，在经过约50～60秒后，从示意上说，全部的液体成分吸收于吸水性部件5中，液体成分不残留在检测部3上。此外，与上述相同，在HCG浓度实质上为零的精度管理用的控制尿中，添加hCG，调制各种浓度的试样，确认检测部3的胶态金的着色程度。
各试样的hCG浓度分别为0(IU/L)，3(IU/L)，10(IU/L)，30(IU/L)，100(IU/L)，300(IU/L)，1000(IU/L)，3000(IU/L)和10000(IU/L)。其结果是，在采用具有大于等于10(IU/L)的hCG浓度的试样的场合，可确认着色。
象这样，通过使吸水性部件5的长度变化，使通气阻力变化，可对移动速度进行控制，可调整与各浓度相对应的着色程度。
象上述说明的那样，如果采用本实施例的特异性结合分析装置，也可通过吸水性部件，控制通过玻璃制的第1毛细管1的开口部4的相反侧的通气阻力，对信号强度进行控制。在这里，在确保必要的吸水能力的基础上，可通过控制玻璃纤维滤纸GA200的密度、长度等，对通气阻力进行控制。即，可通过使吸水性部件5发挥吸水效果与通气阻力控制效果的方式进行控制。
第3实施例在本实施例中，采用图5和图6所示的特异性结合分析装置。图5表示本发明的另一特异性结合分析装置的分解透视图。象图5所示的那样，该特异性结合分析装置采用由玻璃，或树脂制成的衬底6，由玻璃或树脂，或金属等形成的间隔件7和8(x方向的厚度为50μm)，玻璃纤维滤纸GA200(东洋株式会社生产)形成的吸水性部件9(x方向的厚度为50μm)，以及由玻璃或树脂形成的透明衬底10制成。另外，在衬底6上，固定可参与作为第2特异性结合物质的hCG的夹层反应的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体，形成检测部11。
图6表示图5所示的特异性结合分析装置的组合体透视图。象图6所示的那样，透明衬底10通过间隔件7和8，与衬底6重叠。由此，通过间隔件7和8以及透明基板10，在内部，构成空间形成部。另外，可构成试样点染部，该试样点染部可同时将试样送入该空间形成部。另外，在本装置中，通气阻力通过下述方式控制，该方式为调整间隔件7和8的厚度(x方向)，构成吸水性部件9的玻璃纤维滤纸的密度，吸水性部件9与间隔件7和8之间的间隙(y方向)，或上述间隙的长度(z方向)。
在本实施例中，采用图5和图6所示的本发明的特异性结合分析装置，对作为分析对象的，尿中的人体绒毛性性腺刺激激素(hCG)进行分析。第1特异性结合物质和第2特异性结合物质采用可参与作为与hCG的夹层反应的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体，标识材料采用荧光胶乳。在本实施例中，可采用反射吸光分光仪，测定检测部与第2特异性结合物质发生特异性结合的荧光胶乳的荧光强度，正确地对hCG进行定量。具体来说，对检测部11，照射相当于该荧光胶乳的激励波长的光，仅仅对与在检测部11产生的荧光波长相当的光分光，进行测定。
另外，在制作检测部11后，在由衬底6和透明衬底10构成的空间形成部的内壁，涂敷去脂奶的分散水溶液，对其进行干燥，由此，将上述内壁保护。
首先，调制与通过荧光胶乳标识的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体的混合溶液，将该混合溶液作为试样。在该状态的试样中，作为分析对象的hCG与通过荧光胶乳标识的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体结合。按照规定容量，将该试样点染于作为试样点染部的开口部4处。该规定容量指大于等于因毛细管现象，可到达吸水性部件9的一端的容量的容量，并小于等于吸水性部件9可吸收的最大容量。但是，为了确保定量性，必须每次点染同一容量。在点染后，试样因毛细管现象的作用而上升，通过检测部11。接着，在经过约5分钟后，从示意上，全部的液体成分为吸水性部件9吸收，液体成分不残留于检测部11上。
此时，被点染的试样中的分析对象与第2特异性结合物质发生特异性结合。由此，分析对象通过第2特异性结合物质，固定于检测部3上。即，通过荧光胶乳标识的，作为第1特异性结合物质的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体，与通过分析对象hCG而固定于检测部3上的，作为第2特异性结合物质的抗hCG单克隆的(monoclonal)抗体结合。由此，在检测部3处，发出与分析对象hCG的浓度相对应的荧光。在这里，由于在检测部11上，没有残留未与第2特异性结合物质发生特异性结合的荧光胶乳，故与没有存在吸水性部件9的场合相比较，背景(background)大幅度地降低。
在HCG浓度实质上为零的精度管理用的控制尿中，添加hCG，调制各种浓度的试样。根据上述这样的原理，测定检测部11的荧光胶乳的荧光强度。各试样的hCG浓度分另别为0(IU/L)，3(IU/L)，10(IU/L)，30(IU/L)，100(IU/L)，300(IU/L)，1000(IU/L)，3000(IU/L)和10000(IU/L)。其结果是，在具有大于等于10(IU/L)的hCG浓度的试样中，可确认着色，并且该荧光强度的直线性可确认到1000(IU/L)。即，可确认浓度在10(IU/L)～1000(IU/L)的范围内的定量性。
可通过调整通气阻力，对该定量特性进行控制。即，可对最低检测浓度，呈现直线性的最高浓度进行控制。
象上面所描述的那样，如果依据本实施例的特异性结合分析装置，可通过控制试样点染部12的相反侧的通气阻力，控制试样通过检测部11的速度。另外，由于在检测部11的试样的移动方向侧，借助吸水性部件9的存在，使在空间形成部的内部呈现的毛细管现象的液体输送力增加的吸水性部件9的效果，未与第2特异性结合物质结合的成分不会残留于检测部，故可减小检测信号的背景(background)，信号的S/N提高。由于这些原因，可进行定量性的控制，并且可使信号的S/N的提高造成的最小检测浓度提高。
另外，在本实施例中，在点染前已将所标识的第1特异性结合物质与尿混合，但是，也可使该第1特异性结合物质，在该点染部12与检测部11之间，保持在干燥状态。由此，可直接将尿点染于试样点染部12，进行分析。在此场合，可通过作为液体试样的尿，使保持在干燥状态的第1特异性结合物质处于湿润状态，可自由地移动，在分析对象和第1特异性结合物质结合的状态，移向检测部，同样，可产生对应于浓度的荧光。
象上面所示的那样，如果依据本实施例的特异性结合分析装置，可自由地设定分析中的灵敏度，浓度范围。
象上述那样，如果依据本发明的特异性结合分析方法和其所采用的装置，则可控制试样通过检测部的速度，另外，通过第2特异性结合物质而未固定的成分难于残留于检测部上，由此，可自由地设定灵敏度，浓度范围，也提高灵敏度。由于这些原因，本发明在实用方面是极为有效的。
权利要求
1.一种特异性结合分析方法，该方法采用下述特异性结合分析装置，该特异性结合分析装置包括试样点染部，该试样点染部点染包括分析对象物的液态的试样；空间形成部，该空间形成部与上述试样点染部连接，呈现毛细管现象；检测部，该检测部可检测在上述空间形成部的内部，因特异性结合反应而产生的信号，上述被点染的试样因毛细管现象的作用，移向空间形成部内的检测部，产生特异性结合反应，检测该特异性结合反应所形成的信号，由此，对上述分析对象进行定性，定量，其特征在于在上述检测部的，上述试样的移动方向的下游侧，增加在上述空间形成部呈现的毛细管现象产生的液体输送力。
2.根据权利要求1所述的特异性结合分析方法，其特征在于通过对上述试样通过上述检测部的速度进行控制，控制上述特异性结合反应发生的时间。
3.根据权利要求2所述的特异性结合分析方法，其特征在于通过对上述空间形成部与外部气氛连通的部分的截面积和距离进行控制，控制上述试样通过上述检测部的速度，控制上述特异性结合反应所发生的时间。
4.根据权利要求2所述的特异性结合分析方法，其特征在于通过在上述空间形成部与外部气氛连通的部分，设置第1通气性部件，控制上述试样通过上述检测部的速度，控制上述特异性结合反应所发生的时间。
5.根据权利要求4所述的特异性结合分析方法，其特征在于通过将具有因毛细管现象而呈现的具有吸水特性的第2通气性部件，设置于上述检测部的试样的移动方向的下游侧，增加毛细管现象产生的液体输送力。
6.根据权利要求1～5中的任何一种所述的特异性结合分析方法，其特征在于该方法包括下述步骤步骤A使与上述分析对象发生特异性结合的，并且由可检测的标识材料标识的第1特异性结合物质，与上述分析对象结合；步骤B使与上述分析对象发生特异性结合，并且可实质上固定于上述检测部的第2特异性结合物质，与上述分析对象结合；步骤C测定在上述检测部产生的，因上述标识材料而获得的信号的强度；步骤D根据在上述步骤C中已测定的信号的强度，对上述试样中的分析对象进行定性，或定量。
7.根据权利要求6所述的特异性结合分析方法，其特征在于在上述试样点染部，点染规定容量的试样后，使在上述步骤B，通过毛细管现象的作用，未与上述第2特异性结合物质结合的成分，移向上述空间形成部的内部的检测部的试样的移动方向的下游侧。
8.根据权利要求6或7所述的特异性结合分析方法，其特征在于在上述步骤C，通过上述分析对象，将上述第1特异性结合物质与第2特异性结合物质结合。
9.根据权利要求1～8中的任何一项所述的特异性结合分析方法，其特征在于将上述第1特异性结合物质保持在上述试样点染部与检测部之间的空间形成部与试样的接触面上，使上述试样被点染，其处于湿润状态，由此，使上述第1特异性结合物质可在上述接触面上运动，移向上述检测部。
10.根据权利要求1～9中的任何一项所述的特异性结合分析方法，其特征在于上述信号带有颜色，为荧光，或发光。
11.根据权利要求1～10中的任何一项所述的特异性结合分析方法，其特征在于上述第1特异性结合物质和第2特异性结合物质中的至少一个为抗体。
12.根据权利要求6～11中的任何一项所述的特异性结合分析方法，其特征在于上述标识材料为包括金属溶胶，染料溶胶，含有荧光物质的颗粒，或着色胶乳颗粒。
13.一种特异性结合分析装置，该特异性结合分析装置包括试样点染部，该试样点染部点染包括分析对象物的液态的试样；空间形成部，该空间形成部与上述试样点染部连接，呈现毛细管现象；检测部，该检测部可检测在上述空间形成部的内部，因特异性结合反应而产生的信号，上述已点染的试样因毛细管现象的作用，移向空间形成部内的检测部，产生特异性结合反应，检测该特异性结合反应所形成的信号，由此，对上述分析对象进行定性，定量，其特征在于其还包括下述机构，该机构在上述检测部的，上述试样的移动方向的下游侧，增加在上述空间形成部呈现的毛细管现象产生的液体输送力。
14.根据权利要求13所述的特异性结合分析装置，其特征在于其包括第1通气性部件，该第1通气性部件设置于上述空间形成部与外部气氛连通的部分。
15.根据权利要求13或14所述的特异性结合分析装置，其特征在于上述机构为第2通气性部件，该第2通气性部件具有因毛细管现象而呈现的吸水特性，并且设置于上述检测部的，试样的移动方向的下游侧。
16.根据权利要求13～15中的任何一项所述的特异性结合分析装置，其特征在于将上述第1特异性结合物质保持在试样点染部与检测部之间的空间形成部与试样的接触面上，使上述试样实现点染，其处于湿润状态，由此，可使上述第1特异性结合物质在上述移动面上运动，使其朝向上述检测部移动。
17.根据权利要求13～16中的任何一项所述的特异性结合分析装置，其特征在于上述空间形成部由二块平板，与规定上述平板的间距的间隔件构成，上述检测部设置于上述平板上，通过上述平板，检测上述特异反应所产生的信号。
全文摘要
本发明的课题在于提供可自由地设定分析的灵敏度，浓度范围的特异性结合分析方法和其采用的装置。采用下述特异性结合分析装置，使所需的分析最优化，该装置控制试样通过检测部的速度，另外在检测部，不残留无用成分。
文档编号G01N33/543GK1450351SQ0312436
公开日2003年10月22日 申请日期2003年4月5日 优先权日2002年4月5日
发明者河村达朗 申请人:松下电器产业株式会社