专利名称：使用气相和/或汽相分析用于分析检测的生物学测定方法
使用气相和/或汽相分析用于分析检测的生物学测定方法背景本公开一般涉及用于通过气相和汽相分析方法来完成生物学测定的改善的方法， 更具体地讲，涉及在测定中使用载体颗粒作为支持物，以增强气相和汽相分析。气相和汽相分析方法例如离子淌度光谱法(ion mobility spectrometry, IMS) 可用于检测和鉴定低浓度的爆发性、药物、化学武器和其它目标化学品。这通过以下列文 献为例的IMS操作来完成美国专利号3，699，333、美国专利号5，027，643、美国专利号 5，491，337 和美国专利号 6，690，005。在过去，已经完成了费力的工作，以配置生化试验或测定，使得气相或汽相分析设 备能分析测定并能检测指定靶标的存在和/或浓度。在通过标准竞争性或非竞争性测定方 法的这些生物学测定中，标记的靶标结合部分存在，其中或者标记本身可转移至气相或者 用于将另一分子转化成产物，而产物可转移至气相，其中可以通过气相分析设备对它们进 行分析，用于分析有关所测靶标的定量或定性信息。Regina等(W0 88/06732)已经给出直 接分析已转移至气相的标记的前一种方法。使用将其他分子转化为气相类物质的标记的后 一种方法在痕量生物学分析上具有优势，因为单一标记用于将多种分子转化为产物，所述 产物容易转移至气相。这有效扩增了靶标的存在并有助于其检测。这第二种方法也已经在 一些不同实施方案中显示，所有这些因所使用的测定方法而具有有限的检测能力。这第二种方法的具体的实施方案是非竞争性酶联免疫吸收测定(ELISA)，其中 靶标捕获在固体支持物上并且用生物学识别配体(例如抗体)特异性标记，所述标记可 以用酶修饰。在充分洗涤后，将支持物暴露至含有多种前体分子的溶液，所述分子可以 被酶重复转化为气相分析设备可检测的形式。在ELISA中，所产生的可检测分子的数量 与所存在的靶标浓度直接相关。在相关ELISA技术中，竞争性形式酶标记被从支持物上 置换或者必须与靶标竞争性结合支持物，导致在这两种情况下，随着靶标浓度增加而产 生较少的可检测分子。因此，气相分析设备所提供的数值仍可用于与样品中所存在的 靶标量相关。描述这些标准测定形式和术语的示例性参考文献可参见E. P. Diamandis, & T.K.Christopoulos(Immunoassay ;Academic Press :1996) ；S.S.Deshpande(Enzyme Immunoassays :From Concept to Product Development ；Springer :1996)； 禾口 J. R. Crowther(The ELISA Guidebook (Methods in Molecular Biology) ；Humana : 1996)。具体地讲，Diamond等(美国专利 4，629, 689)、Snyder 等(Journal of Microbiological Methods. 27(1996)81-88 & U. S. Statutory Invention Registration H1563,7/2/1996)禾口 Eiceman (Field Analytical Chemistry and Technology. 1 (4) 213-226，1997)都显示了用气相分析设备分析的ELISA。然而，在这些示例性实例的每一个 中，进行ELISA的方法限制了总体生物学检测方法的简单性、效率和分析用途。Diamond等试图通过在挥发后浓缩气相类物质，来改进该方法。Eiceman等试图改 进，不通过分析顶部空间，而是通过采取大量支持物上的一部分未浓缩反应体积并从滤纸 条上进行分析。Snyder等试图通过粗糙和低效的方法例如“桨/组织”组合而减少酶促反 应体积，来改进已知方法。
在所有情况下，在产生所检测分子之前，使用浓缩转化物(converter)(或酶)的 更全面的方法，特别有利。众所周知的是，在酶促和其它催化转化反应中，非常需要提高反 应溶液中催化剂或酶的浓度。这不仅增加转化过程的反应速率，因而允许在设定时间内可 检测分子的数量的更大变化，而且还在更小液体体积中完成该反应。因为允许引入气相分 析设备的液体量是有限的，通过在减少的液体体积中完成转化，就可以对更大部分的反应 溶液进行采样，因此可将更大部分的可检测的分子递送给分析设备，同时还减少了通常会 干扰或降低小分子挥发和/或分析效率的液体基质的数量。在独立的科学团体中可以找到在产生气相分子之前达到该转化物浓度的方法，其 中许多靶标测定研究使用了具有微米或纳米尺寸和特异性识别能力(例如用抗体标记来 修饰)的分散的结合颗粒。已经知道这些分散的结合颗粒通过增加测定表面积以及允许增 加靶标对固体底物或非分散的支持珠的识别动力学，而改进了生物学测定的效率和性能。 此外，将特定理化性能(即静电、密度、磁性、折射率、光学)添加到微米或纳米尺寸的分散 的结合颗粒上，允许有效分离，并且对于该申请更重要的是，靶标类物质的浓度。用于测定 的分散的结合颗粒的示例性实例可参见美国专利4，628，037。然而，增加结合动力学、分离便利性和标记浓度的这两种工作实体的组合(即对 生物识别方案的气相分析和使用微米或纳米尺寸的分散的结合颗粒)，至今并未具体地显 示、描述或涉及。因此，需要有这样的改进方法如何进行通过气相或汽相分析设备来分析的测定， 以提高结合识别效率，提高测定标记转化反应的效率，提高递送给分析设备的测定成分的 部分，并减少递送给分析设备的测定样品体积。简述本文所公开的是用于生物学测定的气相和/或汽相分析的方法。在一个实施方案 中，为测定样品中的靶标的方法，所述方法包括进行测定，其中所述测定在第一含水液体中 包括与具有已知靶标选择性的第一靶标结合剂结合的分散的载体颗粒，与转化物部分结合 的第二靶标结合剂，和可含有靶标的试验样品；其中所述转化物部分与所述靶标选择性结 合，所述靶标与所述载体颗粒选择性结合，其量取决于所述试验样品中所述靶标的浓度；从 所述第一含水液体中浓缩和分离所述载体颗粒；用体积为所述第一含水液体体积的一部分 的第二含水液体替代所述第一含水液体，并将所述载体颗粒分散在其中；将底物施用到所 述第二含水液体中的所述分散的载体颗粒上，并使带有所述转化物部分的所述底物转化形 成产物；用汽相和/或气相分析技术检测所述底物和/或产物中的变化。在另一个实施方案中，为用汽相和/或气相分析来分析在液相生物学测定中产生 的可检测产物的方法，该方法包括将用第一选择性靶标结合剂修饰的磁性载体颗粒和用 第二选择性靶标结合剂修饰的转化物部分分散到测定溶液中，其中所述磁性载体颗粒的平 均粒度为5纳米至100微米，其中所述转化物部分是酶，并且其中所述测定溶液包含有待检 测靶标的样品；产生由至少一种磁性颗粒、至少一种靶标和通过所述第二选择性靶标结合 剂连接的至少一种酶组成的复合物，如果所述靶标存在；施加磁场并从未复合的酶和测定 溶液中浓缩复合的和未复合的磁性载体颗粒；将所述浓缩的磁性载体颗粒再次分散在第二 溶液中，所述第二溶液的体积是所述第一含水液体体积的一部分，其中所述第二溶液含有 用于与复合的酶反应产生可检测产物的底物；通过将所述反应溶液的等分试样插入到气相和/或汽相分析仪中来检测所述可检测的产物，其中所述反应溶液含有可检测的产物、未 反应底物、复合的磁性载体颗粒和未复合的磁性载体颗粒，并且其中所述底物本身通过气 相和/或汽相分析仪 是不可检测的。在再一个实施方案中，为用汽相和/或气相分析来分析在液相生物学测定中产生 的可检测产物的方法，该方法包括将用第一选择性靶标结合剂修饰的磁性载体颗粒和用 第二选择性靶标结合剂修饰的转化物部分分散到测定溶液中，其中所述磁性载体颗粒的平 均粒度为5纳米至100微米，所述转化物部分是酶，其中所述测定溶液包含有待检测所述靶 标的样品；产生由至少一种磁性颗粒、至少一种靶标和通过所述相应的靶标结合剂连接的 至少一种酶组成的复合物，如果所述靶标存在；施加磁场并从未复合的酶和测定溶液中浓 缩复合的和未复合的磁性载体颗粒；将所述浓缩的磁性载体颗粒再次分散在反应溶液中， 其中所述溶液含有用于与所述复合的酶反应产生不可检测产物的可检测底物；和通过将所 述反应溶液的等分试样插入到气相和/或汽相分析仪中来检测所述可检测的底物，其中所 述反应溶液含有产物、未反应底物、复合的磁性载体颗粒和未复合的磁性载体颗粒，其中所 述产物本身通过气相和/或汽相分析仪是不可检测的。根据以下发明详述以及附图，将会更加充分地理解本发明实施方案的这些和其它 的特征和优势。要注意的是，权利要求的范围是由其中的描述所限定，而不是由本发明说明 书所述特征和优势的具体讨论而限定。附图简述

图1图示说明了一个实施方案，其中选择性靶标结合剂(例如抗体)修饰的分散 的载体颗粒、与靶标结合剂(例如抗体)连接的酶和含有靶标的样品在相互作用后，产生复 合的载体颗粒，其在浓缩和洗涤之后，从不可检测底物中产生可检测的产物。图2图示说明了一个实施方案，其中选择性靶标结合剂(例如抗体)修饰的分散 的载体颗粒、与靶标结合剂(例如抗体)连接的酶和不含靶标的样品在相互作用后，不产生 复合的载体颗粒，其在浓缩和洗涤之后，不从不可检测底物中产生任何可检测的产物。图3图示说明IMS对含有邻硝基苯酚_ β -D-半乳吡喃糖苷(ONPG)的样品以及各 种阴性对照和阳性对照的响应。图4图示说明IMS对含有磷酸对硝基苯酚(PPNP)的样品以及各种阴性对照和阳 性对照的响应。技术人员将会理解，附图中的要素是为了简便和清楚的目的进行阐明，并且没有 必要扩大规模。本发明实施方案的详述当它涉及用汽相和/或气相分析对液相生物学测定中产生的小分子进行分析时， 本文所公开的是用于提高效率的方法。作为实例，将具体提及通过非竞争性ELISA所产 生的小分子，其使用离子淌度光谱法(IMS)(在本文也称为离子阱淌度光谱法(ion trap mobility spectrometry, ITMS))进行分析。然而，本领域技术人员应当理解，所述方法可 用于任何液相测定，所述测定使用具有已知靶标选择性的识别部分，并且所述测定以竞争 性或非竞争性形式来操作，其中测定结果导致存在的可检测分子的数量的变化，或者通过 可检测分子的产生或者消耗，其取决于靶标的存在或浓度。同样，由液相测定调整的小分子 可用其它类型的汽相或气相分析来分析，包括但不限于光谱法、质谱法、微分迁移率光谱法(differential mobility spectrometry)、气相色谱以及结合选择性分析化合物和质量、 电学、光学和/或热传导等的其它分析方法。

所述方法通常包括靶标物质与靶标结合剂修饰的转化物部分以及靶标结合剂修 饰的载体颗粒这两者结合，其中所述载体颗粒是微米或纳米尺寸的颗粒，其功能是在生物 学测定中作为捕获相。载体颗粒配置成具有允许标记转化物类物质浓缩的物理和/或化学 性能。这形成载体颗粒复合物，如图1的具体实施方案所示。重要的是，如果靶标不存在， 载体颗粒复合物就不会形成并且可检测的化合物的数量就没有变化，如图2的具体实施方 案所示。可用合适的封闭剂例如酪蛋白先将非特异性结合位点封闭起来。在非竞争性测定 形式中，测定标记了具有转化物类物质的载体颗粒捕获的靶标，所述转化物类物质将分子 转化为气相分析可检测的形式或不可检测的形式。在竞争性测定形式中，测定从支持物上 置换了转化物类物质标记或者转化物类物质必须与靶标竞争性结合支持物，其中结合的转 化物类物质将分子转化为气相分析可检测形式或不可检测形式。此外，使用载体颗粒作为 底物，为待发生的反应提供了增加的表面积；增加了靶标结合动力学；增加了洗涤步骤的 便利性；允许将增加的表面积浓缩成更小的反应体积，用于转化不可检测或可检测的分子； 并且，允许增加有待引入气相分析仪的测定成分与交互缓冲液基质(conversation buffer matrix)的比率。因为更小的反应体积，前体小分子转化成产物小分子的转化将会以较快 速率发生，因为在文献中已经显示酶催化在颗粒上比在固体底物上更快。此外，不仅是小分 子产生得更快，而且浓度将更快地增加，因为反应发生在较小体积中，导致小分子达到临界 浓度更快，此时小分子可在溶液上开始建立分压。减少的反应体积也允许整个溶液更快蒸 发并允许可检测小分子从液相中更快地释放到汽相中。另外，减少的反应体积能提高测定 成分与支持缓冲液之间的比率，这等于更少反应体积成分进入汽相，因此减少了背景信号/ 噪声。在液相测定方法中使用所述分散的载体颗粒，将会通过改进检测限和灵敏度(通 过增加的表面积和更容易将产物释放到汽相和/或气相中，以进行上述检测)而影响最终 用户，将会减少洗涤步骤的数目以及减少测定步骤的总数目；并且它将会减少进行测定的 时间。与现有技术的支持物相反，测定的生物识别动力学在所述分散的载体颗粒上更快，小 分子转化动力学更快，而且可检测的小分子将会以更大的数量、更快地释放到汽相和/或 气相中。在测定期间，将载体颗粒分散到测定溶液中。选择载体颗粒，使得颗粒可以通过光 作用力(optical force)、电力、磁力、重力或压力而从测定溶液中快速分离。在一个实施方 案中，载体颗粒是磁性的，其可通过施加磁场而从测定溶液中容易地分离和/或浓缩。在非竞争性测定形式中，测定样品的制备通常包括将目标靶标例如抗原与靶标结 合剂修饰的分散的载体颗粒和具有共价连接的转化物部分的靶标结合剂在合适液体通常 是水基液体中混合，形成复合的载体颗粒，如图1的一个实施方案所示。或者，在竞争性测 定形式中，测定样品的制备类似于非竞争性测定，除了靶标结合剂修饰的转化物部分或者 被靶标从复合物中置换或者与靶标竞争性结合至载体颗粒之外。因此，载体颗粒上存在的 转化物部分的数量与存在的靶标的数量呈负相关性。在这两种测定形式中，再将复合的和 未复合的载体颗粒从上清液中分离出来。例如，如图1所示，对于磁性颗粒，将颗粒在磁性 颗粒浓缩器中放置一段时间，让磁性颗粒有效地沿侧壁收集，这通常需要大约几分钟至约30分钟，然后停止浓缩器内的磁场并除去上清液。在该方式中，相对于现有技术方法而言， 分离时间基本上是减少了。载体颗粒，一旦分离，就在合适的水性缓冲液中洗涤一次或多 次。然后，将浓缩的颗粒分散到酶的底物中，以产生可检测的产物，如果靶标存在，因此允许 形成复合的载体颗粒。如果靶标不存在，复合的载体颗粒不形成，并且第二 溶液中不存在 酶，因而没有可检测的产物产生，如图2所示。在所有情况下，将包含复合的颗粒、未复合的 颗粒、未反应的底物和可检测的产物的样品等分试样然后引入汽相光谱仪例如IMS中。在 IMS的情况下，首先收集相应的可检测产物的漂移时间。将样品加热并定量测定可检测的产 物。应当注意，在以上给出的实例中，第二抗体是不需要的，如果在载体颗粒上孵育的捕获 抗体与酶缀合。然而，使用第二抗体缀合物可避免损失所产生的酶联抗体，所述抗体用于可 能希望检测的各抗原。载体颗粒并不打算限制在任何具体类型，虽然不同类型可提供不同益处。载体颗 粒可以是磁性的并通过施加磁场，在处理期间从测定中分离出来；可以是带电荷的并通过 施加电场而从测定中分离出来；相对于测定溶液具有独特的折射率，使得光子可用于提供 用于分离的光作用力，例如光阱、光镊(optical tweezer)等；或者可以具有相对高的密 度，使得重力或离心力可用于浓缩颗粒。分离过程将会允许浓缩测定的转化物部分并改进 转化处理方面并改进气相分析设备的界面方面。在利用载体颗粒密度的应用中，密度范围 为约 0. lmg/mL 至约 lmg/mL。载体颗粒可以呈任何合适形式，对颗粒的大小和/或形状并无任何限制。在一个 实施方案中，颗粒基本上是球形的。例如，可以使用直径介于约5纳米至100微米之间的球 形颗粒。在其它实施方案中，可以使用平均直径介于约50纳米至5微米之间的球形颗粒。 粒度分布形态可以是单峰、双峰或多峰。颗粒大小可影响许多参数。例如，如果使用较小的 颗粒，最大可达到的阵列密度(array density)相应更大。然而，具有较大直径的颗粒的较 大表面积允许每个颗粒上连接更多靶标，对于每个颗粒来说，导致更低的检测限和更高的 分析灵敏度和潜在更高的信号强度。在一个实施方案中，颗粒可包括任何合适的磁性材料，例如铁(Fe)、钴(Co)或 镍-铁合金。本文所用的术语磁性材料包括顺磁性材料。颗粒可包括非磁性材料，例如聚 苯乙烯，其中包埋了磁性亚颗粒(例如Fe3O4颗粒)。这样的颗粒可例如分散在整个非磁性 材料中或者可形成非磁性材料的核心或其表面下的壳。对于生物学应用，优选至少颗粒表 面是由生物相容性材料制成。可用于涂覆在非生物相容性材料例如铁的表面的非磁性生物 相容性材料包括聚合物材料例如聚苯乙烯、胶乳和本领域众所周知的许多其它材料。在某些实施方案中，使用顺磁性颗粒。顺磁性材料仅当存在外部磁场时才会磁 化，因此顺磁性颗粒表现出最小的簇集。生物相容性顺磁性颗粒可得自多家制造商(例如 Dynal,Bangs Labs，Spherotech)。这些颗粒广泛用于各种生物学用途，并且已充分建立起 用于偶联生物学分子例如核酸和蛋白质的方案。另外，可得到预先缀合各种结合配体的顺 磁性颗粒。超顺磁性颗粒在商业应用上已有超过15年的已证明的记录。这类颗粒是通过在 聚合时将铁氧体晶体分布在整个聚苯乙烯颗粒中而制得。所述晶体是铁磁体，但因其具有 纳米尺寸，所以它们的表现不是铁磁性的，而是顺磁性的(该现象被称为超顺磁性)。据信 定向晶体如此小，以至于它们在室温下因热效应而随机排列。这样的颗粒排列基本上没有剩磁；在施加的磁场中它基本上线形磁化，而当去掉外场时，磁性基本上完全消失。该特征导致最小聚集。当与酶一起使用时，为了效力可将所述颗粒包封(例如以避免接触含铁的 分子)并且表面可容易的修饰，以共价连接生物分子例如核酸或蛋白质或有机小分子。颗粒可包含可检测材料(例如染料、着色剂、杂交标记)，或具有特定折射率，使所 述颗粒可在阵列上得以检测并可在其它颗粒以及测定溶液中得以鉴别。可检测材料可掺入 到颗粒中，可存在于表面上，和/或可与颗粒连接。具体的可检测材料或其组合可对应于与 颗粒连接的具体的探针，使得可检测材料的鉴定也可鉴定该探针。在某些实施方案中，具 体的可检测材料可对应于具体靶标，使得可检测材料的鉴定也可鉴定与探针相互作用的靶 标。市售颗粒(磁性和非磁性的)的范围巨大。可得到由许多不同材料和尺寸制备的 颗粒。掺入各种分子例如荧光染料的颗粒、与各种部分缀合的颗粒或具有表面修饰而便于 所述缀合的颗粒都可得到。用于液相测定的合适的靶标包括活(living)靶标和非活(non-living)靶标。靶 标的实例包括但不限于原核细胞、真核细胞、细菌、病毒、蛋白质、多肽、毒素、脂质体、颗粒、 配体、氨基酸、核酸、激素、药物、有毒工业化学品、有毒工业材料和其它小分子，它们或者是 单独的或者为其任何组合。靶标包括上述活靶标或非活靶标的提取物。原核细胞的实例包括但不限于细菌，也包括其提取物。真核细胞的实例包括但不 限于酵母细胞、动物细胞和组织。毒素的实例包括但不限于炭疽。颗粒的实例包括但不限 于胶乳、聚苯乙烯、二氧化硅和塑料。术语“肽”是指任何长度的低聚物或聚合物，其中组成单体为通过酰胺键连接的α 氨基酸，并包括氨基酸二聚体以及多肽、肽片段、肽类似物、天然存在的蛋白质、突变蛋白、 变体蛋白或化学修饰蛋白、融合蛋白等。肽分子的氨基酸可以是20种常规氨基酸中的任何 氨基酸、常规氨基酸的立体异构体(例如D-氨基酸)、常规氨基酸的结构变体(例如异缬氨 酸)或非天然存在的氨基酸，例如α，α-二取代的氨基酸、N-烷基氨基酸、β-丙氨酸、萘 基丙氨酸、3-吡啶基丙氨酸、4-羟基脯氨酸、0-磷酸丝氨酸、N-乙酰基丝氨酸、N-甲酰基甲 硫氨酸、3-甲基组氨酸、5-羟基赖氨酸和正亮氨酸。另外，术语“肽”包括具有翻译后修饰 的肽，所述修饰例如糖基化、乙酰化、磷酸化等。本文所用的术语“寡核苷酸”包括任何长度的核苷酸聚合形式，或者是核糖核苷酸 或者是脱氧核糖核苷酸。该术语仅指分子的一级结构。因此，该术语包括三链、双链和单链 的DNA，以及三链、双链和单链的RNA。该术语也包括寡核苷酸的修饰形式(例如通过甲基 化和/或通过加帽子)和寡核苷酸的非修饰形式。更具体地讲，该术语包括聚脱氧核糖核 苷酸(含2-脱氧-D-核糖)、聚核糖核苷酸(含D-核糖)、任何其它类型的多核苷酸(其 是嘌呤碱基或嘧啶碱基的N-糖苷或C-糖苷)、以及含有非核苷酸主链的其它聚合物例如 聚酰胺(例如肽核酸(PNA))和聚吗啉(作为Neugene商业上可得自Anti-Virals，Inc.， Corvallis, Oregon)聚合物和其它合成的序列特异性核酸聚合物，条件是所述聚合物含有 核碱基(nucleobase)，其构型允许碱基配对和碱基堆积，例如在DNA和RNA中发现的那样。 术语“多核苷酸”、“寡核苷酸”、“核酸”和“核酸分子”彼此在长度上没有区别，这些术语仅 指分子的一级结构。因此，这些术语包括例如3'-脱氧-2' ,5' -DNA、寡脱氧核糖核苷 酸N3' P5'氨基磷酸酯、2' -0-烷基-取代的RNA、双链和单链DNA、以及双链和单链RNA、DNAiRNA杂合体，和PNA与DNA或RNA之间的杂合体，并且还包括已知类型的修饰，例如本领 域已知的标记、甲基化、“帽子”、用类似物对一个或多个天然存在的核苷酸的取代、核苷酸 内修饰，例如具有不带电荷键的那些(例如膦酸甲酯、磷酸三酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯 等)、具有带负电荷键的那些(例如硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)和具有带正电荷键的那 些(例如氨基烷基氨基磷酸酯、氨基烷基磷酸三酯)、含有侧链部分的那些，例如蛋白质(包 括核酸酶、毒素、抗体、信号肽、聚-L-赖氨酸等)、具有嵌入剂的那些(例如吖啶、补骨脂素 等)、含有鳌合剂的那些(例如金属、放射性金属、硼、氧化性金属等)、含有烷化剂的那些、 具有修饰键的那些( 例如α-端头异构核酸等)、以及无修饰形式的多核苷酸或寡核苷酸。 该术语也包括其它类型的核酸，例如但不限于锁核酸(LNA)。术语“核苷”和“核苷酸”也包括已经被修饰的那些部分，这些部分不仅含有已知 嘌呤碱基和嘧啶碱基，而且还含有其它杂环碱基。这类修饰包括甲基化嘌呤或甲基化嘧啶、 酰化嘌呤或酰化嘧啶或其它杂环。修饰的核苷或核苷酸也可包括在糖部分上的修饰，例如 其中一个或多个羟基被卤素、脂族基团取代，或者经官能化成为醚、胺等。术语“核苷酸单元 (nucleotidic unit) ”将包括核苷和核苷酸。此外，对核苷酸单元的修饰包括重排、添加、取代或嘌呤碱基或嘧啶碱基上官能团 的其它改变，所述碱基与相应互补嘧啶或嘌呤形成氢键。所得到的修饰核苷酸单元任选可 与其它这类修饰的核苷酸单元形成碱基对，但不与A、T、C、G或U形成碱基对。可掺入不会 阻碍多核苷酸功能的碱基位点(Basic site)。任选可通过一种或多种方式，对多核苷酸中 的某些或全部残基进行修饰。本文所用的术语“抗体”包括得自多克隆和单克隆制备的抗体、以及杂合(嵌合) 抗体分子；F (ab' )2和F(ab)片段；Fv分子(非共价杂二聚体)；单链Fv分子(sFv) ；二聚 体和三聚体的抗体片段构建物；人源化抗体分子；和得自所述分子的任何功能性片段，其 中所述片段保留母体抗体分子的特异性结合特性。靶标与颗粒的结合受到颗粒表面化学的控制。颗粒的表面化学可用于通过非特异 性相互作用而结合靶标物质，所述相互作用例如静电相互作用、范德华相互作用(van der Waals interaction)、偶极-偶极相互作用和/或氢键相互作用。或者，载体颗粒可经化学 修饰，以包含与靶标物质选择性相互作用的特异性结合物质。可使用的结合物质的代表性 实例包括但不限于抗原、抗体、适配体、多肽、肽、核酸、蛋白质受体、配体、寡核苷酸、链霉抗 生物素、抗生物素蛋白、生物素、凝集素等。靶标-结合部分可直接或间接地与靶标连接。连接的实例包括但不限于静电连 接、化学连接和物理连接。靶标_结合部分的实例包括但不限于单独的或者为其任何组合 的抗体、适配体、多肽、肽、核酸、抗生物素蛋白、链霉抗生物素、以及抗生物素蛋白和链霉抗 生物素的衍生物。靶标-结合部分的其它非限制性实例包括但不限于蛋白质、肽、多肽、糖蛋白、选 择配体、脂蛋白、磷脂、寡核苷酸等，例如酶、免疫调节剂、受体蛋白、抗体和抗体片段，其优 先结合标记物质，所述标记物质是由靶标位点产生或与靶标位点相关。已知蛋白质优先结合标记物质，所述标记物质是由损伤产生或与损伤相关。例如， 抗体可用于针对癌症相关物质，以及针对表现出增加的或独特的抗原性标记的任何病理性 损伤，例如针对心血管损伤相关物质，例如血管凝块，包括血栓和栓塞、心肌梗塞和其它器官梗塞，和动脉粥样硬化斑块；炎性损伤；和感染性因子(agent)和寄生性因子。

癌症状态包括癌症、黑素瘤、肉瘤、成神经细胞瘤、白血病、淋巴瘤、神经胶质瘤、骨 髓瘤和神经系统肿瘤。感染性疾病包括由侵入体内的微生物或寄生虫引起的那些。可用作靶标结合部分的蛋白质物质包括蛋白质、肽、多肽、糖蛋白、脂蛋白等；例 如，激素、淋巴因子、生长因子、白蛋白、细胞因子、酶、免疫调节剂、受体蛋白、抗体和抗体片 段。特别有兴趣的蛋白质物质是抗体和抗体片段。术语“抗体”和“抗体片段”一般是指与 抗原特异性结合而形成免疫复合物的免疫球蛋白或其片段。抗体可以是任何类型的全免疫球蛋白；例如IgG、IgM、IgA、IgD、IgE、具有抗原或 表位的双特异性或多特异性的嵌合或杂合抗体。它可以是多克隆抗体，尤其是人源化抗体 或来自人的亲和纯化抗体。它可以是来自合适动物的抗体；例如来自灵长类动物、山羊、兔、 小鼠等。如果抗原决定区(paratope region)得自非人类物种，靶标可以经人源化，以降低 非人类抗体的免疫原性，用于人类诊断或治疗用途。这样的人源化抗体或其片段称为“嵌合 的”。例如，嵌合抗体包括非人类(例如鼠)可变区和人类恒定区。嵌合抗体片段在人可变 区构架区内可包括可变的结合序列或源自非人类抗体的互补决定区(“CDR”)。单克隆抗 体也是合适的，因为它具有高特异性。有用的抗体片段包括F(ab' )2、F(ab)2、Fab'、Fab、 Fv等，包括杂合片段。特定的片段是Fab'、F(ab' ) 2、Fab和F (ab) 2。也可使用保留免疫 球蛋白超变的抗原结合区并具有类似于或小于Fab'片段的大小的任何亚片段。抗体片段 可包括基因工程蛋白和/或重组蛋白，无论是单链或多链，其与抗原_结合位点结合并且以 与天然免疫球蛋白片段基本相同的方式在体内起到固定化靶标结合部分的作用。也可通过 基因工程来产生片段。选择性配体的实例包括卟啉、乙二胺四乙酸(EDTA)和锌指。选择性配体是指对一 种或多种特定靶标具有选择性的配体。可以使用抗体和免疫球蛋白类的混合物，如可使用杂合抗体。有时需要多特异性 (包括双特异性)和杂合的抗体和抗体片段用于检测和治疗损伤，并且包括至少两种明显 不同的单特异性抗体或抗体片段，其中至少两种抗体或抗体片段特异性结合至至少两种不 同抗原(其是由靶向损伤产生或与靶向损伤相关)或者标记物质的至少两种不同表位或分 子(其由靶向损伤产生或与靶向损伤相关)。可以制备类似于抗肿瘤标记杂合体的多特异 性抗体和双特异性抗体片段。针对引起人类大部分感染的微生物(细菌、病毒、原生动物、其它寄生虫)的合适 MAb可用于体外诊断目的。这些抗体和更新的MAb也适合使用。可用于检测和/或治疗心血管损伤的蛋白质包括血纤蛋白特异性蛋白；例如血纤 蛋白原、可溶性血纤蛋白、抗血纤蛋白抗体和片段、片段E1 (是通过交联血纤蛋白的受控纤 溶酶消化而制得的一种人类血纤蛋白的60kDa片段)、纤溶酶(血液中负责溶解新鲜血栓的 一种酶)、纤溶酶原激活物(例如尿激酶、链激酶和组织纤溶酶原激活物)、肝素和纤连蛋白 (一种450kDa的粘性血浆糖蛋白)和血小板指导的蛋白质；例如，血小板、抗血小板抗体和 抗体片段、抗活化血小板抗体和抗活化血小板因子。在一个实施方案中，靶标_结合部分包括识别血纤蛋白单体β "链氨基端的七肽 并与之结合的MAb或其片段。当凝血酶从血纤蛋白原切割两对小肽时，产生血纤蛋白单体。 血纤蛋白单体自发聚集成不溶性凝胶，其进一步稳定形成血凝块。
可用于产生针对它们的特异性抗体的各种抗原或生物标记(并且从中可制备抗 体片段)的公开内容仅仅是作为实例，不应视为以任何方式限制本发明。以竞争性或非竞争性形式，用所述分散的载体颗粒可进行测定。本领域技术人员 众所周知的是，非竞争性测定将会导致转化反应中存在更多转化物部分，而竞争性测定将 会导致转化反应中存在更少转化部分。竞争性或非竞争性测定的结果是，对于任何给定转 化物部分，因靶标类物质的浓度增加，可检测分子的数量的变化将会是相反的并可因此进 行监测。转化物部分通过但不限于静电方式、化学方式和/或物理方式而与靶标结合部分 直接连接。转化物部分负责或者产生或者抑制气相分析的可检测分子。这些分子的非限制 性实例包括允许氧化还原转化、电子转化或酶促转化的无机、有机或生物的催化剂。转化物部分起到放大器的作用；即使仅有少量与结合部分连接的转化物部分保持 结合，转化物部分将会转化许多信号分子。本公开并不限于任何具体的转化物部分，并且将 会一般取决于可检测的/不可检测的分子；其选择在本领域技术人员的技能范围之内。转化物部分可起到如下作用或者从不可检测形式的不可检测类物质产生可检测 类物质(例如用半乳糖苷酶水解来自可检测类物质的糖基)，或者从可检测形式产生不可 检测的形式(例如用过氧化物酶产生这样的基团所述基团聚合或结合两分子的可检测形 式)。在这些情况的每一种下，气相分析设备将监测可检测类物质的产生或减少，并且涉及 存在 的转化物部分的存在(定性)或数量(定量)。也可以理解，也包括这样的反应流程 所述反应流程在转化物部分的作用下开始，最终影响可检测类物质的形式。“底物”是指由转化物部分转化为“产物”的分子的起始形式或者在转化物部分作 用之后的分子的最终形式。底物和产物必须能够通过气相分析仪来区分。在优选的实施方 案中，或者底物或者产物将不能被气相分析仪检测，而它们中的另一种成分则是可检测的。气相离子光谱仪是指检测气相离子的任何仪器。气相离子光谱仪包括提供气相离 子的离子源。气相离子光谱仪包括例如质谱仪、离子淌度光谱仪和总离子流检测设备。在 一个实施方案中，IMS用于检测并随后表征测定的可检测产物。将液相中的载体颗粒和底 物放入IMS内，并加热至约25°C至约600°C的温度，取决于可检测的分子，例如通过酶-底 物反应(其中底物本身是不可检测的)而产生的产物。以下实施例举例说明了本公开的特征，而不应视为对本公开的限制。在实施例中， 以爆发性模式设定运行软件版本8. 12的Itemiser3 ITMS仪器(GE Security, Bradenton, FL)或运行软件版本 3. 19 的 VaporTracer2 ITMS 仪器(GE Security, Bradenton, FL)，默认 采样时间7秒钟，解吸器温度220°C，检测器温度205°C。所有实验运行之前，按照出售者说 明书，以双重模式，使用校准器(calibration trap，部件#M0001319)来校准单元。用适当 位置的半透膜(部件#PA005007)并用系统内存在的爆发性掺杂剂(二氯甲烷(methlyene chloride)，部件#MP005810)来运行系统。
实施例在实施例中，使用以下化学品和试剂。磷酸二氢钠、2- (N-吗啉代)乙磺酸(MES)、 甘氨酸、三(羟甲基)氨基甲烷盐酸盐(Tris)、吐温-20、牛血清白蛋白(BSA)、Triton X-100、邻硝基苯酚-β -D-半乳吡喃糖苷(ONPG)、磷酸对硝基苯酚(PNPP)、邻硝基苯酚(ONP)、对硝基苯酚(PNP)得自Sigma-Aldrich, Inc. (St. Louis, MO)并且按收到时的原样 使用。氯化钠、氢氧化钠和盐酸(浓)得自Fisher Scientific Inc. (Pittsburgh, PA)并 且按收到时的原样使用。用18MΩMilli-Q/JC (Millipore，Billerica, ΜΑ)制备以下缓冲 液并用氢氧化钠或盐酸调节至合适的pH;10mM磷酸盐、137mM NaCl,0. 1% (w/w)Triton Χ-100、0· 1% (w/w)叠氮化钠(ρΗ7·4) ；20mM Tris、500mM NaClU % BSA.O. 吐温 _20(pH 7.6) ； IOOmM 甘 氨酸、125mM NaClUmM MgClUmM ZnCl2 (pH 10. 0) ；25mM MES (pH 6.0)。购 买Dynabeads抗大肠杆菌0157，并按出售者方案，在磷酸缓冲液中洗涤，用于ONPG测定， 或在Tris缓冲液中洗涤，用于PNPP测定，并且稀释至 IXlO8颗粒/mL(Invitrogen, Carlsbad, CA)。亲和纯化的山羊抗大肠杆菌0157:H7、磷酸酶标记的亲和纯化的山羊抗大 肠杆菌0157:H7(0. lmg/ml)和大肠杆菌0157:H7阳性对照，得自KPL(Gaithersburg，MD)并 在50%水50%甘油中再水化并贮存于4°C直到需要时。购买β-半乳糖苷酶缀合的链 霉抗生物素(Rockland，Gilbertsville，PA)，并且按收到时的原样使用。按照出售者方案， 将 EZ-Link Sulfo-NHS-LC-LC-生物素(Thermo-Pierce，Rockford, IL)用于 25mM MES，使 山羊抗大肠杆菌抗体生物素化。用Microcon YM-50旋转滤器(Millipore)，用磷酸缓冲液， 完成纯化步骤。将摩尔比4 1的生物素化抗体链霉抗生物素修饰的酶混合，并让其在 4V反应4小时，得到溶于磷酸缓冲液的抗体终浓度 0. lmg/mL。配制lmg/mL浓度的下列底物溶液和产物溶液溶于磷酸缓冲液的ONPG ；溶于磷酸 缓冲液的ONP ；溶于甘氨酸缓冲液的PNPP ；溶于甘氨酸缓冲液的PNP。ONPG测定将以下成分在600 μ L聚丙烯微量离心管(Fisher Scientific)中混 合150 μ L磷酸缓冲液、IOyL山羊抗大肠杆菌磁性颗粒/磷酸缓冲液、IOyL IXlO9细胞 /mL大肠杆菌阳性对照、10 μ L 0. lmg/mL山羊抗-大肠杆菌-生物素-链霉抗生物素-半 乳糖苷酶/磷酸缓冲液。对这些成分进行短时间的涡旋振荡并在室温下，在旋转台上振摇 30分钟。在此时间点，将微量离心管放入磁性颗粒浓缩器架(Dynal)中1分钟，使磁性颗 粒沿侧壁收集。除去上清液，并更换为300 μ L磷酸缓冲液，通过轻微涡旋振荡使颗粒重悬 于其中。将该步骤再重复2次，最后将颗粒分散在100 μ L lmg/mL ONPG底物/磷酸缓冲液 中，并在37°C加热30分钟。PNPP测定将以下成分在600 μ L聚丙烯微量离心管(Fisher Scientific)中混 合150 μ L Tris缓冲液、10 μ L山羊抗大肠杆菌磁性颗粒/Tris缓冲液、10 μ L IX IO9细 胞/mL大肠杆菌阳性对照、10 μ L 0. lmg/mL山羊抗-大肠杆菌-磷酸酶/Tris缓冲液。对 这些成分进行短时间的涡旋振荡，并在室温下，在旋转台上振摇30分钟。在此时间点，将微 量离心管放入颗粒浓缩器架中1分钟，使所有磁性颗粒沿侧壁收集。除去上清液并更换为 300 μ L Tris缓冲液，通过轻微涡旋振荡使颗粒重悬于其中。将该步骤再重复2次，最后将 颗粒分散在100 μ L lmg/mL PNPP底物/甘氨酸缓冲液中，并在37°C加热30分钟。具体地讲，将IOyL样品溶液用移液管移至织造“金”样品捕获器(部件 #M0001249,GE Security，Bradenton，FL)上，并立即插入到仪器的“微粒”采样口。然后触 发系统以获取样品。通过仪器启动后，取出样品捕获器并丢弃。所收集的数据组由70条光 谱或等离子体色谱组成，它们被100ms的间隔分隔开，将它们全部保存并在单独的计算机 上进行分析。在检查半乳糖苷酶或磷酸酶测定样品之前，以检查测定样品的类似方法，检查lmg/mL ONP/磷酸缓冲液和lmg/mL PNP/甘氨酸缓冲液，以测定产物分子各自的漂移时间。 另外，对lmg/mL ONPG/磷酸缓冲液和lmg/mL PNPP/甘氨酸缓冲液采样，以确保这些底物分 子不能被IMS单元检测。通过IMS单元分析测定溶液之后，检查所收集的数据并收集产物分子相关光谱的 峰高。对于测定相关的各种样品，产物漂移时间相关的峰高见图3和图4所示，显示了在测 定中，用IMS分析使用磁性颗粒的能力。图3和图4也显示了几种阴性对照和阳性对照。有利的是，使用本文所述分散的载体颗粒允许增加存在的表面积的数量，以产生 产物；它允许表面积浓缩成小的反应体积，这使得通过分压的正常发展或通过增加挥发的
容易性，小分子更容易释放到汽相和/或气相中。此外，它也减少了测定过程中的总步骤数目。可以理解，当一个要素称作在另一要素“上”，它可以是直接在另一要素上，或者两 者之间可存在中间要素。相反，当一个要素称为“分散在”或“形成在”另一要素上，应当理 解为所述要素至少部分彼此接触，除非另有说明。本文所用的术语仅仅是为了描述具体实施方案的目的，不应视为对本发明的限 制。本文使用的单数形式“一”和“该”也将包括复数形式，除非上下文另有明确指示。使用 术语“第一”、“第二”等并不意味着任何特定次序，而是为了区别单个要素而包括在内。还 应理解，本说明书所用的术语“包含”和/或“包括”或“含有”表明所述特征、区域、整数、步 骤、操作、要素和/或成分的存在，但不排除一种或多种其它特征、区域、整数、步骤、操作、 要素、成分和/或其组合的存在或添加。除非另有定义，否则本文所用的所有术语(包括技术和科学术语)都具有本发明 实施方案所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。还应理解，术语例如在常用词典 中定义的那些，应当解释为具有与相关领域和本公开上下文中的含义一致的含义，而不能 以理想化的或过份形式化的含义来解释，除非在本文中确有如此定义。尽管，已经参考示例性实施方案描述了本发明的实施方案，但是本领域技术人员 可以理解，在不背离本发明实施方案的范围下，可以进行各种改变并且对其要素而言，可替 换等同实施方案。另外，可以进行许多修改，使具体情况或材料适应本发明实施方案的教 授，而不背离其基本范围。因此，当考虑实施本发明的最佳方式时，本发明的实施方案将不 限于公开的具体实施方案，但是本发明的实施方案将包括落入所附权利要求范围之内的所 有实施方案。
权利要求
1.一种用于测定样品中的靶标的方法，所述方法按顺序包括进行测定，其中该测定在第一含水液体中包括与具有已知靶标选择性的第一靶标结合 剂结合的分散的载体颗粒，与转化物部分结合的第二靶标结合剂，以及可含有靶标的试验 样品；其中所述转化物部分与所述靶标选择性结合，所述靶标与载体颗粒选择性结合，其用 量取决于试验样品中靶标的浓度；从第一含水液体中浓缩和分离所述载体颗粒；用体积为第一含水液体体积的一部分的第二含水液体替代第一含水液体，并将载体颗 粒分散在其中；将底物施用到第二含水液体中的分散的载体颗粒上，并使带有转化物部分的底物转化 形成产物；和用汽相和/或气相分析技术检测所述底物和/或产物中的变化。
2.权利要求1的方法，其中所述靶标增加所述转化物部分与所述载体颗粒的缔合。
3.权利要求1的方法，其中所述靶标减少所述转化物部分与所述载体颗粒的缔合。
4.权利要求1的方法，其中所述载体颗粒是磁性颗粒，且所述从第一液体中分离载体 颗粒包括施加磁场。
5.权利要求1的方法，其中所述载体颗粒是带电荷颗粒，且所述从第一液体中分离载 体颗粒包括施加电场。
6.权利要求1的方法，其中所述载体颗粒相对于第一含水液体的折射率允许使用光作 用力从第一液体中浓缩和分离所述载体颗粒。
7.权利要求1的方法，其中所述载体颗粒的平均粒度为约5纳米至约100微米。
8.权利要求1的方法，其中所述从第一含水液体中分离载体颗粒的时间小于约30分钟。
9.权利要求1的方法，其中由所述底物通过转化物部分的转化而产生的产物是可检测 产物，而所述底物是不可检测的。
10.权利要求9的方法，其中用汽相和/或气相分析技术对所述底物和/或产物中的变 化进行的所述检测包括将具有所述载体颗粒和所述可检测的产物的第二含水液体等分试 样插入到离子淌度光谱仪中。
11.权利要求1的方法，其中由所述底物通过转化物部分的转化而产生的产物是不可 检测产物，而所述底物是可检测的。
12.权利要求11的方法，其中用汽相和/或气相分析技术对所述底物和/或产物中的 变化进行的所述检测包括将具有载体颗粒和可检测的底物的第二含水液体等分试样插入 到离子淌度光谱仪中。
13.权利要求1的方法，其中所述汽相和/或气相分析技术产生所述样品中所选择靶标 的存在或数量的定量或定性测定输出。
14.权利要求1的方法，其中所述靶标包括抗体或抗原。
15.权利要求1的方法，其中所述第一和第二靶标结合剂包括至少一种选自以下的化 学部分抗原、抗体、适配体、多肽、肽、核酸、蛋白质受体、配体、寡核苷酸、链霉抗生物素、抗 生物素蛋白、生物素、凝集素等。
16.权利要求1的方法，其中所述第一和第二靶标结合剂相同。
17.一种用汽相和/或气相分析来分析液相生物学测定中产生的可检测产物的方法， 所述方法包括将用第一选择性靶标结合剂修饰的磁性载体颗粒和用第二选择性靶标结合剂修饰的 转化物部分分散到测定溶液中，其中所述磁性载体颗粒的平均粒度为5纳米至100微米，其 中所述转化物部分是酶，并且其中所述测定溶液包含有待检测靶标的样品；产生复合物，该复合物由至少一种磁性载体颗粒、至少一种靶标和通过所述第二选择 性靶标结合剂连接的至少一种酶组成，如果所述靶标存在；施加磁场，从未复合的酶和测定溶液中浓缩复合的和未复合的磁性载体颗粒； 将所述浓缩的磁性载体颗粒再次分散在第二溶液中，其中所述第二溶液含有用于与复 合的酶反应产生可检测产物的底物；和通过将所述反应溶液等分试样插入到气相和/或汽相分析仪中来检测可检测的产物， 其中所述反应溶液含有可检测的产物、未反应底物、复合的磁性载体颗粒和未复合的磁性 载体颗粒，并且其中所述底物本身通过气相和/或汽相分析仪是不可检测的。
18.权利要求17的方法，所述方法包括在与有待检查所述靶标的样品混合之前封闭非 特异性结合位点。
19.权利要求17的方法，其中所述产生复合物是竞争性的，使得所述复合物存在的数 量与样品中存在的所述靶标的数量负相关。
20.权利要求17的方法，其中所述产生复合物是非竞争性的，使得所述复合物存在的 数量与样品中存在的所述靶标的数量正相关。
21.权利要求17的方法，其中所述气相和/或汽相分析仪是离子淌度光谱仪。
22.权利要求17的方法，其中所述气相和/或汽相分析仪是离子阱淌度光谱仪。
23.权利要求17的方法，其中所述气相和/或汽相分析仪提供样品中所选择靶标的存 在或数量的定量或定性测定输出。
24.权利要求17的方法，其中所述靶标包括抗体或抗原。
25.权利要求17的方法，其中从第一含水液体中分离载体颗粒的时间小于约30分钟。
26.权利要求17的方法，其中所述选择性靶标结合剂包括至少一种选自以下的化学部 分抗原、抗体、适配体、多肽、肽、核酸、蛋白质受体、配体、寡核苷酸、链霉抗生物素、抗生物 素蛋白、生物素、凝集素等。
27.一种用汽相和/或气相分析来分析在液相生物学测定中产生的可检测产物的方 法，所述方法包括将用第一选择性靶标结合剂修饰的磁性载体颗粒和用第二选择性靶标结合剂修饰的 转化物部分分散到测定溶液中，其中所述磁性载体颗粒的平均粒度为5纳米至100微米，并 且所述转化物部分是酶，其中所述测定溶液包含有待检查所述靶标的样品；产生复合物，该复合物由至少一种磁性颗粒、至少一种靶标和通过相应的靶标结合剂 连接的至少一种酶组成，如果所述靶标存在；施加磁场，并从未复合的酶和测定溶液中浓缩复合的和未复合的磁性载体颗粒； 将所述浓缩的磁性载体颗粒再次分散在反应溶液中，其中所述溶液含有用于与复合的 酶反应产生不可检测产物的可检测底物；和通过将所述反应溶液的等分试样插入到气相和/或汽相分析仪中来检测可检测的底物，其中所述反应溶液含有产物、未反应底物、复合的磁性载体颗粒和未复合的磁性载体颗 粒，其中产物本身通过气相和/或汽相分析仪是不可检测的。
28.权利要求27的方法，所述方法包括在与样品混合之前封闭非特异性结合位点。
29.权利要求27的方法，其中所述施加磁场从测定溶液中分离磁性载体颗粒，然后停 止磁场，将所述磁性颗粒再次分散到反应溶液中。
30.权利要求27的方法，其中所述产生复合物是竞争性的，使得所述复合物存在的数 量与样品中存在的所述靶标的数量负相关。
31.权利要求27的方法，其中所述产生复合物是非竞争性的，使得所述复合物存在的 数量与样品中存在的所述靶标的数量正相关。
32.权利要求27的方法，其中所述气相和/或汽相分析仪是离子淌度光谱仪。
33.权利要求27的方法，其中所述气相和/或汽相分析仪是离子阱淌度光谱仪。
34.权利要求27的方法，其中所述气相和/或汽相分析仪提供样品中所选择靶标的存 在或数量的定量或定性测定输出。
35.权利要求27的方法，其中所述靶标包括抗体或抗原。
36.权利要求27的方法，其中所述施加磁场和所述再次分散测定溶液的载体颗粒的时 间小于约30分钟。
37.权利要求27的方法，其中所述靶标结合剂包括至少一种选自以下的化学部分抗 原、抗体、适配体、多肽、肽、核酸、蛋白质受体、配体、寡核苷酸、链霉抗生物素、抗生物素蛋 白、生物素、凝集素及其组合。
全文摘要
本发明公开了涉及小分子分析时用于提高效率的方法，所述小分子在分析溶液中的浓度取决于通过用汽相和/或气相分析的液相生物学测定所测靶标的浓度。所述方法一般包括靶标物质竞争性或非竞争性结合到在生物学测定中用作底物的载体颗粒上。使用所述载体颗粒作为底物，为所发生的反应提供了增加的表面积，提高了洗涤步骤的便利性，并允许将增加的表面积浓缩成更小的反应体积，然后引入汽相光谱仪和/或气相光谱仪例如离子淌度光谱仪中。
文档编号G01N33/538GK102066933SQ200980105788
公开日2011年5月18日 申请日期2009年2月11日 优先权日2008年2月13日
发明者A·D·普里斯 申请人:莫弗探测公司