专利名称：检测克伦特罗药物残留的胶体金试纸卡的制作方法
技术领域：
本实用新型属于兽药残留的免疫化学速测技术领域，具体涉及一种克伦特罗药物
检测试纸卡。
背景技术：
克仑特罗(Clenbuterol)属于P _兴奋剂，近年来被非法添加到饲料中以提高脂肪型动物的瘦肉率和加速动物生长，因其添加剂量是治疗剂量的5-10倍，以至于在动物体内残留量高而给消费者带来危害。 目前克伦特罗残留常用的检测方法有两种。 一种是色谱分析，如气相色谱法(GC)，由于复杂的仪器设备和繁琐的过程，不适合现场监控和大量样本筛查。另一种为免疫学方法，如酶联免疫吸附法(ELISA)。它的缺点是检测时间长，费用较高，不利于在基层单位推广使用。而且，这两种方法都需要专业技术人员进行操作。

实用新型内容本实用新型的目的提供一种灵敏度高、成本低、操作简单、检测时间短的试纸卡。 本实用新型的试纸卡包括塑料盒体和盒体内的试纸条，塑料盒体上带有加样孔和
观察窗，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样本吸收垫、结合物释放垫、反应膜
和吸水垫等组成，与常规试纸条不同的是，其中的结合物释放垫不是完全覆盖在样本吸收
垫之下，而是部分区域覆盖于样本吸收垫之下，结合物释放垫的二分之一至三分之一区域
覆盖于样本吸收垫之下，优选结合物释放垫的三分之一区域覆盖于样本吸收垫之下。 这样做的好处是可以延长检测结果观察时间，样本吸收垫也可以将检测液体充分
吸收与金标抗体完全接触充分反应，再层析至反应膜上进行反应，可以有效的减少误差。还
可以防止检测样本中一些干扰成份使金标抗体中的蛋白失去活性，影响金标抗体与包被原
的结合。 所述反应膜上分别包被有克伦特罗_载体蛋白偶联物构成的检测线印迹"I "和包被羊抗鼠IgG构成的质控线印迹"I "，检测线位于距离结合物释放垫一侧0. 5cm处，检测线和质控线平行。从而可以用于克伦特罗药物的残留检测。 本实用新型试纸卡塑料盒体上带有加样孔和观察窗，盒体内试纸条的底板为可PVC板或者是其它硬质而不吸水的材料；反应膜可为硝酸纤维素膜或者醋酸纤维素膜；样本吸收垫可由玻璃棉或聚酯材料制成；结合物释放垫可由纤维制成，结合物释放垫层包被有克伦特罗抗体_胶体金结合物。
偶联克伦特罗载体蛋白可用卵血清蛋白、或人血清白蛋白、牛血清白蛋白、血蓝蛋白等，在反应膜上的检测线印迹和质控线的对照印迹组合排列可为"I I "[0010] 本实用新型试纸卡具有如下有益效果 1.特异性强，灵敏度高。克伦特罗快速检测试纸卡以胶体金标记高亲和力的单克隆为基础制备而成，金标抗体中金颗粒与抗体分子之间无价健形成，二者通过异性电荷间的范德华力相结合，胶体金对单克隆特异性和亲和力影响很小，且具有较高的标记率。因此，快速检测试纸卡具有较高的特异性和灵敏度。试纸卡检测灵敏度可达5 i！ g/ml (g/g)。[0012] 2.操作简便快速。使用快速检测试纸卡时无需任何其它试剂，只要将样本用滴管滴入试剂卡孔内，滴加3滴(约100微升)，加样后计时，5 8min内观察结果。[0013] 3.显示检测结果形象、直观准确。快速检测试纸卡以显示红线色"I "及"I I "印迹作为检测线的阳性和阴性标记，即在硝酸纤维素膜上显示一条红线"I "印迹表示在被检测样本液中克伦特罗的含量大于等于5 g/ml (g/g)，两条红线"I I "印迹表示在被检测样本中克伦特罗含量低于5i!g/ml(iig/g)，结果判定形象、直观、准确、简单明了，不容易出现结果误判。 4.成本低，投资少。使用快速检测试纸条，不需另配仪器设备及其他试剂，使现场检测一步到位，成本低廉，投资少，见效快。 5.易于大范围推广应用。快速检测试纸卡操作简单，能较好满足不同层次人员的需要，如专业化验、海关检疫、卫生防疫、质量监测、动物产品加工、集化养殖到个体养殖等，具有广阔的市场前景和较大的经济、社会效益。

图1为克伦特罗检测试纸条结构示意图，其中，1、样本吸收垫；2、结合物释放垫；3、反应膜；4、吸水垫；5、检测线；6、质控线；7、底板； 图2为克伦特罗检测试纸卡俯视结构示意图，其中，8、塑料盒体；9、加样孔；10、观
察窗； 图3为克伦特罗快速检测试纸卡阴性(图3. a)、阳性(图3. b)、无效(图3. c)显色示意图，其中T检测线，C为质控线。
具体实施方式
以下结合附图做进一步说明[0020] 1、克伦特罗检测试纸卡 样本吸收垫(1)由玻璃棉制成，结合物释放垫(2)为吸附有胶体金标记的克伦特罗单克隆抗体的纤维层，反应膜(3)为硝酸纤维素膜，吸水垫(4)为吸水材料层制成，检测线(5)包被有克伦特罗-载体蛋白偶联物，质控线(6)包被有羊抗鼠IgG， PVC背衬(7)为支持层由塑料薄片条制成，在PVC背衬(7)上按顺序粘附硝酸纤维素膜(3)、吸水垫(4)、结合物释放垫(2)和样本垫(l)，将样本垫覆盖在结合物释放垫三分之一处，组成试纸条封装于带有加样孔(9)和观察窗(10)的特制的塑料盒体(8)中。[0022] 2、试纸卡的使用[0023] (1)样本前处理[0024] 尿液 清亮尿液可直接取100 ii 1点样，如尿液混浊，3000g以上室温离心5min，取上清液100 ii 1点样。[0026] 猪肉 称取匀浆后的组织2g到离心管中，加入lml水振荡混匀，在8(TC水浴中10min，取出冷却至室温，取上清液100 ill点样。[0028] (2)用试纸卡检测 将样本用滴管滴入试剂卡孔内，滴加3滴，加样后计时，5 8min内观察结果。[0030] 3、检测结果分析 克伦特罗在样本中浓度高于5iig/ml(iig/g)时，胶体金标记的克伦特罗抗体与克伦特罗药物全部结合，从而在检测区内因为竞争反应不会与克伦特罗偶联抗原结合而不出现红色条带。阴性样本在检测过程中由于缺少抗体抗原竞争反应，将会在检测区与质控区内出现红色条带。 阳性当质控区显示一条红色条带，而检测区不显色，快速检测试纸卡以显示红线色"l"，判为阳性，如图3.b图所示。 阴性当质控区显示一条红色条带，检测区同时也显示出一条红色条带，且检测区颜色接近或浅于质控区时，快速检测试纸卡以显示红线色为"I I "，判为阴性，如图3. a所示。 无效当质控区不显示出红色条带，则无论检测区显示出红色条带与否，该试纸卡判为无效，如图3.C所示。
权利要求一种检测克伦特罗药物残留的胶体金试纸卡，其特征在于试纸卡包括塑料盒体和盒体内的试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样本吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫，结合物释放垫的二分之一至三分之一区域覆盖于样本吸收垫之下。
2. 如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于塑料盒体上带有加样孔和观察窗。
3. 如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于结合物释放垫的三分之一区域覆盖于样本 吸收垫之下。
4. 如权利要求1所述的试纸卡，其特征在于所述反应膜上具有包被有克伦特罗_载体 蛋白偶联物构成的检测线和包被羊抗鼠IgG构成的质控线。
5. 如权利要求4所述的试纸卡，其特征在于所述的检测线与质控线平行。
6. 如权利要求4所述的试纸卡，其特征在于检测线位于距离结合物释放垫一侧0. 5cm处。
7. 如权利要求1或2所述的试纸卡，其特征在于所述底板为PVC板，所述反应膜为硝酸纤维素膜。
8. 如权利要求1或2所述的试纸卡，其特征在于所述的样本吸收垫由玻璃棉或聚酯材 料制成，所述的结合物释垫层由纤维制成。
9. 如权利要求1或2所述的试纸卡，其特征在于所述的结合物释放垫为包被有克伦特 罗抗体-胶体金结合物。
专利摘要本实用新型提供了一种克伦特罗检测试纸卡，包括塑料盒体和盒体内的试纸条，试纸条由底板、附着在底板上依次紧密相连的样本吸收垫、结合物释放垫、反应膜和吸水垫组成，结合物释放垫的二分之一至三分之一区域覆盖于样本吸收垫之下。在反应膜层上具备包被有克伦特罗-载体蛋白偶联物构成的检测线和包被有羊抗鼠IgG构成质控线；结合物释放垫包被有胶体金标记的克伦特罗抗体。本实用新型试纸卡具有便携性好，灵敏度高，误差小、检测时间短等特点，可以在组织及尿液样本中克伦特罗残留量的检测中发挥重要作用。
文档编号G01N33/558GK201489000SQ20092010854
公开日2010年5月26日 申请日期2009年6月1日 优先权日2009年6月1日
发明者万宇平, 何方洋, 冯才伟, 冯才茂, 刘平, 刘福林, 张建军, 朱亮亮, 李勇, 汪善良, 罗贵昆, 赵正苗, 陈炜琳 申请人:北京望尔康泰生物技术有限公司;北京望尔生物技术有限公司