专利名称：人m2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒及制备方法
技术领域：
本发明涉及免疫分析及医学检验技术领域，具体的，本发明涉及一种人M2型丙酮 酸激酶化学发光免疫分析试剂盒及其制备方法。
背景技术：
癌症是目前威胁人类健康的主要致死疾病之一，癌症已超过心脑血管疾病成为致 死原因的第一位的疾病，严重危害着人民健康和生命安全，且有逐年上升的趋势。癌症的最 佳治疗时期在癌细胞转移前，此时可通过手术或药物治疗将其彻底清除。因此早期发现早 期治疗至关重要。绝大多数癌症早期患者并无任何症状，很难被发现。因此只有建立准确可 靠的早期检测方法，通过体检筛查才能发现早期病变，才有可能及时采取有效的治疗措施， 免疫分析技术为这种早期筛查提供了可能。近年来研究发现，M2型丙酮酸激酶(M2PyruVate Kinase，M2-PK)在肺癌等癌症诊断、动态监测、抗癌疗效评价及预后判断中具有广泛的应用 价值。
M2型丙酮酸激酶是一种新发现的肿瘤标志物，作为肺癌新的特异性标记物来探讨 其在肺癌诊断、动态监测/抗肺癌疗效评价及预后评估等方面的作用，已成为国内外肺癌 研究的热点。丙酮酸激酶是糖酵解途径的一个关键酶，在三磷酸核苷的合成过程中也起决 定性作用。PK有两种结构基因(L基因、M基因)和四种同工酶分别为L型、R型、Ml型、M2 型，这4种同工酶的分布具有组织特异性，常以酶的活性四聚体形式存在。当肿瘤发生时往 往先表现为PK的组织特异性同工酶(如肌肉及脑中的M1-PK)表达减少，随之发生M2-PK 同工酶的表达上调，酶从传统的四聚体型转变成二聚体型，在肿瘤细胞中呈过度表达。所以 称这种M2-PK为肿瘤M2-PK或TU M2-PK，M2-PK能在体液中被大量监测到。肿瘤发生时往 往伴随二聚体型M2-PK含量的增加，在有足够氧气供应的实体瘤(如肺癌)中，谷氨酸酵解 提供大量的丙酮酸，这些谷氨酸酵解和糖酵解中产生的丙酮酸用来合成乳酸、谷氨酸和脂 肪酸，从而释放出糖酵解过程中甘油醛3-磷酸脱氢酶作用下产生的氢，以保证肿瘤细胞中 能量的供给，可见在肿瘤新陈代谢中发挥着极其重要的作用。Oremek G等用健康对照195 例，新确诊的不同病理类型的肺癌患者140例为对象，检测血浆中TU M2-PK的水平。研究 显示，肿瘤患者的TU M2-PK水平比对照组明显升高，且特异性为95%，在小细胞肺癌为78%， 腺癌和非小细胞肺癌分别为73%和85%。
目前对M2-PK的检测方法主要有ELISA法和胶体金法，如德国SCHEBO BIOTEO公 司建立了一种可以检测患者血浆中M2-PK的酶联免疫方法。该方法具有简便快捷和无污染 等优点，但与化学发光技术相比具有灵敏度不够高、线性范围窄等缺点。
复旦大学附属肿瘤医院公开了《一种检测肿瘤型M2丙酮酸激酶的试剂盒及其制 备方法》，该试剂盒采用胶体金测定技术，在测定区包被抗人肿瘤型M2丙酮酸激酶抗体，参 比区包被抗鼠IgG或抗原液；对肿瘤型M2丙酮酸激酶进行半定量分析测定，10分钟内完成 测试。胶体金试剂盒便于携带和保存，操作简便，快速，但是准确性较差，无法进行精确定量 测定。深圳市安群生物工程有限公司公开了一种《人肿瘤M2型丙酮酸激酶抗原决定簇多肽、抗体及其在诊断试剂盒上的应用》的发明专利，该发明主要是制备人肿瘤M2型丙酮酸激 酶抗原决定簇多肽和多克隆抗体。发明内容
本发明的目的是克服现有技术的不足，提供一种灵敏度高，检测时间短，特异性 好，稳定可靠的人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒。
本发明的技术方案概述如下
一种人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，包括以下组份
①M2型丙酮酸激酶标准品；
②包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒；
③辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体；
④化学发光底物A和B ;
⑤白色不透明微孔板；
⑥洗涤液；
其中，所述包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒经过以下步骤制备
①取2. Oml质量含量为2. 5%的磁颗粒悬浮液，磁板分离弃上清，用O. 02mol/L pH 值为7. O的磷酸盐缓冲液洗磁颗粒一次；所述磁颗粒悬浮液中的液体是O. 05mol/L，pH值为 7. 4的磷酸盐缓冲液；
②将O. 02mol/L pH值为7. O的磷酸盐缓冲液与步骤①获得的磁颗粒混合，使总体 积为2. O 5. Oml ；
③加入2. Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，于摇床上匀化10 20分钟；
④加入4. O 10. Omg碳二亚胺，于摇床上勻化16 20小时；
⑤用O. 02mol/L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液洗涤2次；
⑥加入Tris-EDTA缓冲液，调节总体积至2. 0ml，置于2 4°C保存。
所述辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体是用下述方法制备
①取2. Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，加入O. 5 1. Oml浓度为O. 02mol/L, pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液溶解，2 4°C保存；
②取10. Omg的辣根过氧化物酶，加入2. Oml去离子水溶解，取出O. 5 1. 0ml，加 入O. 2ml浓度为O. lmol/L的NaIO4水溶液，室温下避光反应O. 5 1. 5小时；
③将步骤①与②获得的液体混合，室温下避光反应4 6小时；
④向步骤③获得的溶液中加入O.1ml浓度为3mg/ml的NaBH4水溶液，室温下避光 反应I 2小时；
⑤用O. 02mol/L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液透析16 24小时，再用HPLC进行 二次纯化，收集蛋白峰，加入等体积甘油后于-20°C下冷冻保存。
所述化学发光底物A是用下述方法制成
①配制O. 02mol/L pH 值为 8. O 的 Tris-HCl 缓冲液；
②将5 IOmmol鲁米诺加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混勻，2 4°C避光保存。
所述化学发光底物B是用下述方法制成
①配制O. 02mol/L pH 值为 8. O 的 Tris-HCl 缓冲液；
②将O. 6 1. Ommol四苯硼钠、1. Smmol铁氰化钾、1. Ommol肉桂酸、10. Ommol过氧化氢加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C保存。
所述洗涤液由下述方法制成
取6. 05g三轻甲基氨基甲烧、8. 5g NaCl、l. Oml Tween-20,加去离子水至1L,溶解后用HCl调pH至7. 5。
M2型丙酮酸激酶标准品的配制
将O. 02mol/L, pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液与胎牛血清按体积比4:1的比例混合配制成基础缓冲液，用基础缓冲液将M2型丙酮酸激酶抗原稀释成浓度为0、2. 5U/mL、6. 4U/ mL、16U/mL、40U/mL、100U/mL 的标准品。
本发明的优点
本发明试剂盒可以准确定量检测病人血清中M2-PK的含量，对于肺癌等恶性肿瘤的检测具有重要的指导意义，与传统的ELISA方法相比，本发明灵敏度高，特异性好，线性范围宽，且稳定性、可靠性和准确度高，安全环保，操作简便。


图1M2-PK试剂盒(实施例1)标准曲线。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。
实施例1
人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，包括以下组份
①M2型丙酮酸激酶标准品；
②包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒；
③辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体；
④化学发光底物A和B ;
⑤白色不透明微孔板；
⑥洗涤液；
其中，所述包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒经过以下步骤制备
①取2. Oml质量含量为2. 5%的磁颗粒悬浮液，磁板分离弃上清，用O. 02mol/L pH 值为7. O的磷酸盐缓冲液洗磁颗粒一次；所述磁颗粒悬浮液中的液体是O. 05mol/L，pH值为 7. 4的磷酸盐缓冲液；
②将O. 02mol/L pH值为7. O的磷酸盐缓冲液与步骤①获得的磁颗粒混合使总体积为2. Oml ；
③加入2. Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，于摇床上匀化10分钟；
④加入4. Omg碳二亚胺，于摇床上匀化16小时；
⑤用O. 02mol/L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液洗涤2次；
⑥加入Tris-EDTA 缓冲液(TrisO. 05mol/L，EDTAO. 005mol/L，BSA0. 1%， Proclin3001. OmL/L, ρΗ=7· 5)，调节总体积至 2. 0ml，置于 2 4°C保存。
所述辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体是用下述方法制备
①取2. Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，加入O. 5ml浓度为O. 02mol/L, pH值为 7. 4的磷酸盐缓冲液溶解，2 4°C保存；
②取10. Omg的辣根过氧化物酶，加入2. Oml去离子水溶解，取出O. 5ml,加入O.2ml浓度为O. lmol/L的NaIO4水溶液，室温下避光反应O. 5小时；
③将步骤①与②获得的液体混合，室温下避光反应4小时；
④向步骤③获得的溶液中加入O.1ml浓度为3mg/ml的NaBH4水溶液，室温下避光 反应I小时；
⑤用O. 02mol/L，pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液透析16小时，再用HPLC进行二次纯 化，收集蛋白峰，加入等体积甘油后于-20°C下冷冻保存；
所述化学发光底物A是用下述方法制成
①配制O. 02mol/L pH 值为 8. O 的 Tris-HCl 缓冲液；
②将5mmol鲁米诺加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C避光保存。
所述化学发光底物B是用下述方法制成
①配制O. 02mol/L pH 值为 8. O 的 Tris-HCl 缓冲液；
②将O. 6mmol四苯硼钠、1. 5mmol铁氰化钾、1. Ommol肉桂酸、10. Ommol过氧化氢加 入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C保存。
所述洗涤液由下述方法制成
取6. 05g三轻甲基氨基甲烧、8. 5g NaCl、l. Oml Tween-20,加去离子水至1L,溶解 后用HCl调pH至7. 5。
M2型丙酮酸激酶标准品的配制
将O. 02mol/L, pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液与胎牛血清按体积比4:1的比例混合 配制成基础缓冲液，用基础缓冲液将M2型丙酮酸激酶抗原稀释成浓度为0、2. 5U/mL、6. 4U/ mL、16U/mL、40U/mL、100U/mL 的标准品。
实施例2
人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，包括以下组份
①M2型丙酮酸激酶标准品；
②包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒；
③辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体；
④化学发光底物A和B ;
⑤白色不透明微孔板；
⑥洗涤液；
其中，所述包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒经过以下步骤制备
①取2. Oml质量含量为2. 5%的磁颗粒悬浮液，磁板分离弃上清，用O. 02mol/L pH 值为7. O的磷酸盐缓冲液洗磁颗粒一次；所述磁颗粒悬浮液中的液体是O. 05mol/L，pH值为 7. 4的磷酸盐缓冲液；
②将O. 02mol/L pH值为7. O的磷酸盐缓冲液与步骤①获得的磁颗粒混合使总体 积为3. Oml ；
③加入2. Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，于摇床上匀化15分钟；
④加入7. Omg碳二亚胺，于摇床上匀化18小时；
⑤用O. 02mol/L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液洗涤2次；
⑥加入Tris-EDTA 缓冲液(TrisO. 05mol/L，EDTAO. 005mol/L，BSA0. 1%， Proclin3001. OmL/L, pH=7. 5)，调节总体积至 2. 0ml，置于 2 4°C保存；
所述辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体是用下述方法制备
①取2. Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，加入O. 8ml浓度为O. 02mol/L, pH值为 7. 4的磷酸盐缓冲液溶解，2 4°C保存；
②取10. Omg的辣根过氧化物酶，加入2. Oml去离子水，溶解后取出O. 8ml，加入O.2ml浓度为O. lmol/L的NaIO4溶液，密封后于室温下避光反应1. O小时；
③将步骤①与②获得的液体混合，室温下避光反应5小时；
④向步骤③获得的溶液中加入O.1ml浓度为3mg/ml的NaBH4溶液，室温下避光反 应1. 5小时；
⑤用O. 02mol/L, pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液透析20小时，再用HPLC进行二次纯 化，收集蛋白峰，加入等体积甘油后于-20°C下冷冻保存；
所述化学发光底物A是用下述方法制成
①配制O. 02mol/L pH 值为 8. O 的 Tris-HCl 缓冲液；
②将Smmol鲁米诺加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C避光保 存；化学发光底物B工作液的配制
①配制O. 02mol/L pH 值为 8. O 的 Tris-HCl 缓冲液；
②将O. 8mmol四苯硼钠、1. 5OmmoI铁氰化钾、1. Ommol肉桂酸、10. Ommol过氧化氢 加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C保存。
洗涤液和M2型丙酮酸激酶标准品的配制同实施例1。
实施例3
人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，包括以下组份
①M2型丙酮酸激酶标准品；
②包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒；
③辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体；
④化学发光底物A和B ;
⑤白色不透明微孔板；
⑥洗涤液；
其中，所述包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒经过以下步骤制备
①取2. Oml质量含量为2. 5%的磁颗粒悬浮液，磁板分离弃上清，用O. 02mol/L pH 值为7. O的磷酸盐缓冲液洗磁颗粒一次；所述磁颗粒悬浮液中的液体是O. 05mol/L，pH值为 7. 4的磷酸盐缓冲液；
②用O. 02mol/L pH值为7. O的磷酸盐缓冲液与步骤①获得的磁颗粒混合使总体 积为5. Oml ；
③加入2. Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，于摇床上匀化20分钟；
④加入10. Omg碳二亚胺，于摇床上匀化20小时；
⑤用O. 02mol/L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液洗涤2次；
⑥加入Tris-EDTA 缓冲液(TrisO. 05mol/L，EDTAO. 005mol/L，BSA0. 1%， Proclin3001. OmL/L, pH=7. 5)，调节总体积至2. 0ml，置于2 4°C保存待用。
所述辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体是用下述方法制备
①取2. Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，加入1. Oml浓度为O. 02mol/L, pH值为 7. 4的磷酸盐缓冲液溶解，2 4°C保存；
②取10. Omg的辣根过氧化物酶，加入2. Oml去离子水，溶解后取出1. 0ml，加入O.2ml浓度为O. lmol/L的NaIO4溶液，密封后于室温下避光反应1. 5小时；
③将步骤①与②获得的液体混合，室温下避光反应6小时；
④向步骤③获得的溶液中加入O.1ml浓度为3mg/ml的NaBH4水溶液，室温下避光反应2小时；
⑤用O. 02mol/LpH值为7. 4的磷酸盐缓冲液透析24小时，再用HPLC进行二次纯化，收集蛋白峰，加入等体积甘油后于-20°C下冷冻保存；
化学发光底物A工作液的配制
①配制O. 02mol/L pH 值为 8. O 的 Tris-HCl 缓冲液；
②将IOmmol鲁米诺加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C避光保存；
化学发光底物B工作液的配制
①配制O. 02mol/L pH 值为 8. O 的 Tris-HCl 缓冲液；
②将1. Ommol四苯硼钠、1. 5OmmoI铁氰化钾、1. Ommol肉桂酸、10. Ommol过氧化氢加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C保存。
洗涤液和M2型丙酮酸激酶标准品的配制同实施例1。
实施例4
一种人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒实验操作程序(以实施例1试剂盒为例)如下
①将实验所需试剂及人血清样品放置室温，平衡20分钟以上才可进行实验操作；
②取白色不透明微孔板(96孔)进行编号，所有M2型丙酮酸激酶标准品及人血清样品均做双孔重复；
③取各个浓度的标准品和样品50 μ I分别加入相应编号的孔中；
④将辣根过氧 化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体用标记物缓冲液(0.05mol/L 磷酸盐缓冲液，pH=7. 4, NaC18. 5g/L, BSAO. 5%, Proclin3001. OmL/L, Tween-200. 5mL/L)按1:5000稀释，再将其取50 μ I分别加入到各孔；
⑤将包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒用磷酸盐-BSA缓冲液(0.1mol/ L磷酸盐缓冲液，ρΗ=7. 4，BSA0. 2%，Proclin3001. 0mL/L)按1:150稀释得磁颗粒悬浮液；每孔各加入50 μ I磁颗粒悬浮液，充分混匀，室温振荡40分钟；
⑥将其放在磁板上吸附磁颗粒，吸去上清液；
⑦去除磁板，每孔均各加入300 μ I洗涤液；
⑧振荡10秒后，将其放在磁板上吸附磁颗粒，吸去上清液；
⑨重复一遍步骤⑦、⑧；
⑩将化学发光底物A与B工作液等体积混合后，每孔各加入100 μ I混合液；
用化学发光仪测定每孔的相对发光值(RLU)，检测时间O. 2秒/孔；
@利用双对数数学模型，根据标准品浓度以及其对应的RLU建立标准曲线(见附图 1)，根据标准曲线计算样品的浓度；
@打印检测结果报告。
实施例5
本发明试剂盒的方法学鉴定
根据本领域中常规的检定程序对实施例1 3中的三种试剂盒进行鉴定，经过多次实验证明，本发明的试剂盒在Μ2-ΡΚ浓度的测定中，检测的方法学指标如下
①检测范围0 100U/ml ；
②灵敏度最小检出限为O. 15U/ml ;
③精密度批内变异系数小于10%，批间变异系数小于15% ；
④准确性回收率测定在90 110%之间；
⑤特异性与类似物Ml-PK的交叉反应率小于1. 0% ；
⑥稳定性各试剂组分于37°C放置6天后，各组分仍稳定。
实施例6
使用本发明的试剂盒对人血清样本进行检测的实验数据
按照实施例4的操作步骤，使用实施例1的试剂盒，对83例人血样进行测定，由24 例非小细胞肺癌样本，以及59例健康人样本组成，测定结果如下表所示
表1.对83例血液样本的检测结果
权利要求
1.一种人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，其特征包括以下组份 ①M2型丙酮酸激酶标准品； ②包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒； ③辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体； ④化学发光底物A和B; ⑤白色不透明微孔板； ⑥洗涤液； 其中，所述包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒经过以下步骤制备①取2.Oml质量含量为2. 5%的磁颗粒悬浮液，磁板分离弃上清，用0. 02mol/L pH值为7.0的磷酸盐缓冲液洗磁颗粒一次；所述磁颗粒悬浮液中的液体是0. 05mol/L, pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液；②将0.02mol/L pH值为7. 0的磷酸盐缓冲液与步骤①获得的磁颗粒混合使总体积为2.0 5. Oml ； ③加入2.Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，于摇床上匀化10 20分钟； ④加入4.0 10. Omg碳二亚胺，于摇床上勻化16 20小时； ⑤用0.02mol/L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液洗涤2次； ⑥加入Tris-EDTA缓冲液，调节总体积至2.0ml，置于2 4°C保存。
2.根据权利要求1所述的一种人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于所述辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体是用下述方法制备 ①取2.Omg M2型丙酮酸激酶单克隆抗体，加入0. 5 1. Oml浓度为0. 02mol/L, pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液溶解，2 4°C保存；②取10.Omg的辣根过氧化物酶,加入2. Oml去离子水溶解,取出0. 5 1. Oml,加入0.2ml浓度为0. lmol/L的NaIO4水溶液，室温下避光反应0. 5 1. 5小时; ③将步骤①与②获得的液体混合，室温下避光反应4 6小时； ④向步骤③获得的溶液中加入0.1ml浓度为3mg/ml的NaBH4水溶液，室温下避光反应I 2小时； ⑤用0.02mol/L pH值为7. 4的磷酸盐缓冲液透析16 24小时，再用HPLC进行二次纯化，收集蛋白峰，加入等体积甘油后于-20°C下冷冻保存。
3.根据权利要求1所述的一种人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于所述化学发光底物A是用下述方法制成 ①配制0.02mol/L pH值为8. 0的Tris-HCl缓冲液； ②将5 IOmmol鲁米诺加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C避光保存。
4.根据权利要求1所述的一种人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于所述化学发光底物B是用下述方法制成 ①配制0.02mol/L pH值为8. 0的Tris-HCl缓冲液； ②将0.6 1. Ommol四苯硼钠、1. 5mmol铁氰化钾、1. Ommol肉桂酸、10. Ommol过氧化氢加入到IOOOml步骤①所述的缓冲液中，混匀，2 4°C保存。
5.根据权利要求1所述的一种人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒，其特征在于所述洗涤液由下述方法制成 取6 .05g三羟甲基氨基甲烷、8. 5g NaCl、1. Oml Tween-20，加去离子水至1L，溶解后用HCl 调 pH 至 7. 5。
全文摘要
本发明公开了一种人M2型丙酮酸激酶化学发光免疫分析试剂盒及制备方法，所述试剂盒包括以下组份M2型丙酮酸激酶标准品；包被有M2型丙酮酸激酶单克隆抗体的磁颗粒；辣根过氧化物酶标记的M2型丙酮酸激酶单克隆抗体；化学发光底物A和B；白色不透明微孔板；洗涤液；本发明试剂盒可以准确定量检测病人血清中M2-PK的含量，对于肺癌等恶性肿瘤的检测具有重要的指导意义，与传统的ELISA方法相比，本发明灵敏度高，特异性好，线性范围宽，且稳定性、可靠性和准确度高，安全环保，操作简便。
文档编号G01N33/531GK103033623SQ20121053376
公开日2013年4月10日 申请日期2012年12月10日 优先权日2012年12月10日
发明者王立凯, 潘学继, 黄丽娟, 单存海, 曹青, 洪宇霞 申请人:天津市协和医药科技集团有限公司