专利名称：一种聚丙烯酰胺凝胶电泳中的dna银染方法
技术领域：
本发明属于分子遗传学领域的电泳染色方法，具体涉及一种聚丙烯酰胺凝胶电泳 (PAGE)中的DNA银染方法。
背景技术：
聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳是分析蛋白质和核酸样品的一种常用的方法，在分子 生物学及相关学科的基础和临床研究中得以广泛的应用。电泳后对样品的显示有许多的方 法，银染法因具有灵敏度高、无毒无害且显色结果可以随干胶直接保存等优点而得以广泛 应用，特别是近几年在SSCP、DDPCR和DNA测序等实验中更显示出其优越性。传统的银染方 法主要包含下面几个步骤(1)预处理与固定，(2)染色，(3)显色，(4)终止反应。整个过 程比较繁琐，要用到蒸馏水或去离子水、乙醇、硝酸、硝酸银、碳酸钠、甲醛、硫代硫酸钠、乙 酸等多种化学试剂。近年来，许多研究人员对PAGE胶中蛋白质和DNA的银染和显色的过程 优化进行了探索，以求得到简便、快速、灵敏度高且消耗低的银染显色方法，但改良后的方 法，染色与显色的整个过程仍然至少需要40 50min。

发明内容
针对上述现有技术存在的缺陷或不足，本发明的目的在于，提供一种快速、灵敏和 有效的聚丙烯酰胺(PAGE)电泳中的DNA银染方法。为了实现上述任务，本发明采取如下的技术解决方案
一种聚丙烯酰胺(PAGE)电泳中的DNA银染方法，其特征在于，该方法先用质量浓度 0. 1%的AgN03浸泡聚丙烯酰胺凝胶lOmin - 15min,然后对用浸泡后的聚丙烯酰胺凝胶蒸馏 水清洗凝胶2次，再用质量分数0. 04%的Na2C03、每升含有质量浓度37%的HCOH，2mL、质量 分数2%的NaOH的混合溶液显色5min - 6min,显色后用蒸馏水冲洗聚丙烯酰胺凝胶2次。所述的聚丙烯酰胺凝胶的质量浓度为8%或12%，交联度为29 :1。本发明与现有技术相比，具有以下有益的技术效果
传统的DNA银染方法需要5-6种化学试剂，配制4种溶液，花费40-60min才能完成染色 步骤，而本方法只需要4种化学试剂，即硝酸银(AgN03)、氢氧化钠(NaOH)、碳酸钠(Na2C03) 和甲醛(HC0H)，配制2种溶液，花费20min就可以达到与传统染色方法相同的结果，而且在 变性聚丙烯酰胺电泳(PAGE)中，该方法可以将DNA的用量降低到0. 44ng ；在非变性聚丙烯 酰胺电泳(PAGE)中可以将DNA的用量降低到3. 5ng。本方法与传统染色方法相比，不仅节 约了时间，降低了成本，而且提高了检测的灵敏度。


图1是采用本发明对GDF9基因外显子1的PCR产物的变性聚丙烯酰胺凝胶(浓度 12%)电泳检测对比图，图中，A表示本发明的DNA银染方法；B表示采用传统方法1 ；C表示 采用传统方法2 ；D表示采用传统方法3 ；图2是采用本发明对微卫星BM1329PCR产物的非变性聚丙烯酰胺凝胶(浓度8%)电泳 检测图，图中，1、2、3和8表示关中奶山羊；4和5表示济宁青山羊；6和7表示布尔山 羊；9和10表示西农萨能奶山羊，M表示pBR322DNA/MspI ；
图3是采用本发明对GDF9基因外显子2PCR产物的变性聚丙烯酰胺凝胶(浓度12%)电 泳检测图，图中，1、2和3表示关中奶山羊；4、5和7表示济宁青山羊；6和8表示布尔 山羊；9、10和11表示西农萨能奶山羊；
以下通过对3种传统的DNA银染方法与本发明的DNA银染方法的实施例进行比较分 析，对本发明作进一步的详细说明。
具体实施例方式1、3种传统的DNA银染方法与本发明的DNA银染方法的比较
按照表1的操作步骤对3种传统的DNA银染方法(图中的方法1、方法2和方法3)与本 发明的DNA银染方法进行比较，电泳检测结果如图1所示，从图1可知，本发明的染色方法 明显优于3种传统的染色方法。用8%的非变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测400头山羊的微卫星BM1329，使用本发明 的DNA银染方法染色，检测结果如图2所示；
用12%变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检测400头山羊GDF9基因外显子2的多态性，使用本 发明的DNA银染方法染色，试验结果如图3所示。从图2和图3可知，使用优化后的DNA银染方法染色能够获得良好的试验结果。表1 :3种传统的DNA银染方法与本发明的DNA银染方法操作步骤的比较
注表中所用试剂为质量浓度。
表2 3种传统的DNA银染方法与本发明的DNA银染方法效果的比较
权利要求
一种聚丙烯酰胺(PAGE)电泳中的DNA银染方法，其特征在于，该方法先用质量浓度0.1%的AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝胶10min–15min，然后对用浸泡后的聚丙烯酰胺凝胶蒸馏水清洗凝胶2次，再用质量分数0.04%的Na2CO3、每升含有质量浓度37%的HCOH，2mL、质量分数2%的NaOH所构成的混合溶液显色5min–6min，显色后用蒸馏水冲洗聚丙烯酰胺凝胶2次。
2.如权利要求1所述的方法，其特征在于，所述的聚丙烯酰胺凝胶的浓度为8%或12%， 交联度为29 :1。
全文摘要
本发明公开了一种聚丙烯酰胺凝胶(PAGE)电泳中的DNA银染方法，先用0.1%AgNO3浸泡聚丙烯酰胺凝胶10–15min，用蒸馏水清洗2次，其次用0.04%的Na2CO3、2mL的37%HCOH/L、2%的NaOH混合溶液显色5–6min，蒸馏水冲洗2次即可完成全部染色过程。传统的DNA银染方法需要5-6种化学试剂，配制4中溶液，花费40-60min才能完成染色步骤，而本方法只需要4种化学试剂，配制2种溶液，花费20min就可以达到与传统染色方法相同的结果，而且在变性聚丙烯酰胺电泳(PAGE)中，本染色方法可以将DNA的量降低到0.44ng；在非变性聚丙烯酰胺电泳(PAGE)中可以将DNA的量降低到3.5ng。本方法与传统染色方法相比，不仅节约了时间，降低额成本，而且提高了检测的灵敏度。
文档编号G01N1/30GK101865798SQ20101019944
公开日2010年10月20日 申请日期2010年6月12日 优先权日2010年6月12日
发明者侯金星, 姬云涛, 安小鹏, 宋宇轩, 曹斌云, 王建刚 申请人:西北农林科技大学