专利名称：抗氧剂168及其杂质的高效液相色谱分析法的制作方法
技术领域：
本发明涉及三(2，4-二叔丁基苯基)亚磷酸酯及其所含2，4-二叔丁基苯酚的高效液相色谱分析法。
背景技术：
高分子材料在成型、贮存、使用过程中会受到热、光、氧、重金属离子和机械剪切等作用而发生老化，直接影响制品的应用价值，因此通常加入抗氧剂，以抑制或延缓聚合物的氧化降解，延长高分子材料的使用寿命。抗氧剂168[三(2，4-二叔丁基苯基)亚磷酸酯，Tris(2，4-di-tert-butylphenyl)phosphite]属于有机亚磷酸酯类抗氧剂。该类抗氧剂是一种辅助型抗氧剂，通过分解聚合物氧化降解反应中的过氧化物，达到提高聚合物的稳定化性能的目的，因此又称过氧化物分解剂。抗氧剂168本身毒性低，经口半致死量为LD50＞5000mg/kg体重，对兔子进行的毒理研究表明，该产品对皮肤和眼睛的刺激均为阴性。西德、荷兰、意大利、日本、澳大利亚、瑞士、巴西等国均批准该抗氧剂可用于接触食品的聚合物制品中。
实际工业生产中，抗氧剂168的合成路线为
合成的主要原料为2，4-二叔丁基苯酚(2，4-Di-tert-butylphenol)，酚类物质对人体有很大的危害，由于其渗透性强，可以通过皮肤、呼吸道粘膜、口腔等多种途径进入人体，并深入到内部组织，侵犯神经中枢，刺激骨髓，严重时可导致全身中毒和致癌。长期接触酚类物质还会出现皮肤疡痒、皮疹、贫血、记忆力减退等症状，所以控制抗氧剂168中2，4-二叔丁基苯酚的含量十分重要。
对于抗氧剂168的质量控制分析，包括主含量及其中游离酚的定量测定方法，暂未见公开报道。有研究提出通过测定抗氧剂168的甲苯溶液透光率的方法进行抗氧剂168中游离酚含量控制(参见曹树东.现代塑料加工应用，1996，8(5)4.)，但并不可靠。

发明内容
本发明的目的是利用高效液相色谱法建立抗氧剂168工业产品的质量控制分析法。
本发明的技术方案如下一种抗氧剂168及其杂质的高效液相色谱分析法，其特征是高效液相色谱的条件为色谱柱C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；柱温30℃；流动相组成和梯度条件0min 95％甲醇-5％水5min 100％甲醇-0％水20min 100％甲醇-0％水流动相流速1.0mL/min；检测波长275nm；进样量5-10μL。
本发明的抗氧剂168及其杂质的高效液相色谱分析法，可以同时准确分析出抗氧剂168和其生产所用的原料2，4-二叔丁基苯酚的含量，为生产抗氧剂168的质量控制分析提供了简单可靠的方法。


图1为混合标准溶液色谱图，A峰为2，4-二叔丁基苯酚，B峰为抗氧剂168；
图2为抗氧剂168标准曲线图；图3为2，4-二叔丁基苯酚标准曲线图；图4为样品1#的色谱图，A峰为2，4-二叔丁基苯酚，B峰为抗氧剂168；图5紫外光谱图，5a2，4-二叔丁基苯酚的，5b抗氧剂168。
具体实施例方式
主要仪器Varian 5060型高效液相色谱仪，配有Rheodyne 7725i六通进样阀，Waters 486型紫外-可见分光光度检测器；大连江申分离科学技术公司JS-3050色谱工作站；四川仪表四厂Type 3066笔式记录仪。
Waters Alliance 2695型高效液相色谱仪，配有真空脱气机、数码四元泵，120位自动进样器，996型紫外-可见二极管阵列(PDA)检测器，Millinium32色谱管理系统。
上海精密科学仪器有限公司722型分光光度计。
样品和试剂抗氧剂168对照品(≥99.5％)；2，4-二叔丁基苯酚对照品(≥99.0％)；抗氧剂168工业样品由扬子石油化工公司提供；甲醇HPLC级；二氯甲烷分析纯；乙酸乙酯分析纯；甲苯分析纯；实验中流动相和溶液用水均为二次石英蒸馏水。
实施例1.高效液相色谱条件选择1.1溶剂的选择由于抗氧剂168在甲醇中的溶解度小于0.01％，在二氯甲烷中溶解度为36％。考虑到溶解性及溶剂挥发的影响，选择用用二氯甲烷溶解后再用甲醇稀释的办法配制样品，溶解效果较好。二氯甲烷沸点低，具有较强的挥发性，放置时间长，挥发会造成溶液浓度升高。有些作者采用乙酸乙酯和甲醇作为溶剂，试图避免因二氯甲烷沸点低、易挥发带来的误差。但经我们实验证明，由于抗氧剂168在乙酸乙酯中溶解度过小(4％)，在加入甲醇稀释过程中样品溶液会产生混浊。称取20mg抗氧剂168，加入12.5mL乙酸乙酯，用甲醇定容至25mL，重复进样六针，得到抗氧剂168峰面积的RSD为4.5％，2，4-二叔丁基苯酚峰面积的RSD为4.7％，不能实现准确测量。
1.2色谱条件的选择色谱柱C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；柱温30℃；流动相的选择实验表明用100％甲醇等度洗脱，尽管抗氧剂168与杂质分离情况良好，但2，4-二叔丁基苯酚出峰时间太短，与溶剂峰部分重叠，影响测定的准确度。用95％甲醇-5％水等度洗脱，抗氧剂168出峰时间又太长(40min之后)。兼顾杂质分离效果和抗氧剂168的出峰时间，采用梯度洗脱。
梯度条件0min 95％甲醇-5％水5min 100％甲醇-0％水20min 100％甲醇-0％水。
流动相的流速1.0mL/min；1.3检测波长的选择用二极管阵列检测器在200nm～600nm进行连续扫描，抗氧剂168和杂质2，4-二叔丁基苯酚分别在269nm和276nm处有特征吸收(图5)。考虑到2，4-二叔丁基苯酚含量极低，为提高杂质检测的灵敏度，选择275nm作为检测波长。
实施例2.标准溶液及样品溶液的配制精确称量50mg抗氧剂168及5mg 2，4-二叔丁基苯酚对照品，置于50mL容量瓶中，先加入25mL二氯甲烷，振摇使之全部溶解，再用甲醇定容至50mL，配成抗氧剂168浓度为1.0mg/mL及2，4-二叔丁基苯酚浓度为0.1mg/mL的混合标准溶液，使用时逐级稀释到所需浓度。
实施例3.标准曲线的制作在最佳HPLC条件下，混合标准溶液的色图谱如图1。取标准溶液10μL进样，以峰面积对浓度作图。抗氧剂168在溶液浓度0.001～1.0mg/mL的范围内成线性，回归方程为A＝-26457.40723+1.93224E7 C，r＝0.99994，当信噪比S/N＝3时，检出限为0.0001mg/mL。2，4-二叔丁基苯酚在溶液浓度0.0001～0.1mg/mL的范围内成线性，回归方程为A＝-12220.37495+5.21909E7 C，r＝0.99995，当信噪比S/N＝3时，检出限为0.00001mg/mL。取抗氧剂168浓度为1.0mg/mL和2，4-二叔丁基苯酚浓度为0.1mg/mL的混合标准溶液重复进样5次，峰面积的相对标准偏差(RSD)分别为0.3％和1.0％。抗氧剂168和2，4-二叔丁基苯酚的标准曲线见图2和图3。
实施例4.样品的测定精确称取1#抗氧剂168样品20mg，置于25mL容量瓶中，先加入12.5mL二氯甲烷，振摇使之全部溶解，再用甲醇定容至25mL，进样10μL，色谱图如图4，按外标法计算含量。
同样配制三份样品溶液，测得1#样品中抗氧剂168的平均含量为99.24％，RSD为0.1％，2，4-二叔丁基苯酚的平均含量为0.390％，RSD为1.8％。取其中一份样品溶液，重复进样三针，测得抗氧剂168的平均含量为99.36％，RSD为0.2％，2，4-二叔丁基苯酚的平均含量为0.39％，RSD为1.9％。
实施例5.抗氧剂168中2，4-二叔丁基苯酚检测方法的验证目前被国内外一致接受的抗氧剂168中2，4-二叔丁基苯酚最大残留量的指标为0.3％，有些作者提出抗氧剂168工业产品的甲苯透光率与游离酚的含量存在相关性，即如果168中2，4-二叔丁基苯酚的含量符合要求，在425nm和500nm波长下，10％甲苯溶液透光率应该分别不小于97％和98％[8]，我们对此进行了验证。
分别称取不同批号抗氧剂168工业样品约1g，溶于10mL甲苯中，配制成10％的甲苯溶液进行透光率的测定，同时按照本文2.1.3之步骤测定了其中2，4-二叔丁基苯酚含量，结果一并列于表1。
表1抗氧剂168样品的甲苯溶液透光率测定结果与色谱测定结果比较样品批号2# 3# 4# 5# 6#2，4-二叔丁基苯酚含量/％，HPLC0.044 0.0360.0520.1900.380透光率T425，分光光度法 97.498.3 98.9 98.8 98.4透光率T500，分光光度法 98.398.4 99.0 99.0 98.5由表1的结果可知，抗氧剂168的甲苯溶液的透光率和其中2，4-二叔丁基苯酚的含量并无对应关系，且HPLC测得的2，4-二叔丁基苯酚含量为0.380％的样品，透光率实验也符合要求。由抗氧剂168和2，4-二叔丁基苯酚在200nm～600nm的PDA紫外-可见光谱(图5)可知，在425nm和500nm处，2，4-二叔丁基苯酚并无特征吸收，故用这种测量方法估计2，4-二叔丁基苯酚含量没有依据。
权利要求
1.一种抗氧剂168及其杂质的高效液相色谱分析法，其特征是高效液相色谱的条件为色谱柱C18，5μm，150×4.6mm(I.D.)；柱温30℃；流动相组成和梯度条件0min 95％甲醇-5％水5min 100％甲醇-0％水20min 100％甲醇-0％水流动相流速1.0mL/min；检测波长275nm；进样量5-10μL。
全文摘要
一种抗氧剂168及其杂质的高效液相色谱分析法，其特征是高效液相色谱的条件为色谱柱C
文档编号G01N30/88GK1614413SQ20041006532
公开日2005年5月11日 申请日期2004年11月26日 优先权日2004年11月26日
发明者练鸿振, 李丹妮, 刘雯雯 申请人:南京大学